Proventricular dilatation disease (PDD) is a fatal, progressive neurological disorder of psittacine birds, which is caused by a single-stranded RNA virus, the avian bornavirus (ABV). The disease pattern includes lymphoplasmacytic inflammation of the central, peripheral and autonomic nervous system. Seven avian bornavirus genotypes have been identified during the last years. So far only monoinfections with a single genotype of ABV have been attributed to PDD cases. However, after a recent survey discovered a case of a double infection with two different ABV genotypes, this seemed to indicate the need for a more systematic search for mixed infections. Brain specimens from 21 psittacine birds affected with PDD were examined. Aim of the investigation was to generate partial ABV sequences of a part of the matrix protein (M) gene and to evaluate whether sequences of more than one ABV genotype were present. RNA was extracted, and subjected to reverse transcriptase PCR with primer pairs generating a partial sequence of the matrix protein (M) gene, followed by a cloning procedure. Ten clones per case were sequenced in order to elucidate whether sequences characteristic for one or more than one genotype were present. In 19 of 21 cases clear M gene sequences could be generated; in two cases nucleic acid amplification failed. Seven birds were infected with ABV 2 and nine with ABV 4, representing the predominant genotypes in Europe. Two cases showed a mixed infection with ABV 2 and ABV 4, and one case a mixed infection with ABV 2 and ABV 6. These results suggest that the molecular cloning method is a useful tool for distinguishing between single and multiple infection events by different ABV genotypes.
Nota de Investigación—Identificación de infecciones mixtas con diferentes genotipos de bornavirus aviares en aves psitácidas con la enfermedad de dilatación proventricular.
La enfermedad de dilatación del proventrículo es un trastorno fatal, neurológico progresivo de las aves psitácidas, que es causada por un virus ARN de cadena simple, el bornavirus aviar. El patrón de la enfermedad incluye la inflamación linfoplasmocitaria del sistema nervioso autónomo central y periférico. Siete genotipos de bornavirus aviar se han identificado en los últimos años. Hasta el momento sólo las infecciones con un solo genotipo del bornavirus aviar se han observado en los casos de enfermedad de dilatación del proventrículo. Sin embargo, después de un estudio reciente se observó un caso de una infección doble con dos genotipos de bornavirus diferentes, por lo tanto parece ser necesaria una búsqueda más sistemática para detectar infecciones mixtas. Se examinaron las muestras cerebrales de 21 psitácidos afectados con dilatación del proventrículo. El objetivo de la investigación fue generar secuencias parciales del gene de la proteína matriz (M) de bornavirus aviares y para determinar si las secuencias de más de un genotipo de bornavirus estaban presentes. Se extrajo el ARN y se sometió a una transcripción reversa y PCR (RT-PCR) con pares de iniciadores que incluían parcialmente la secuencia del gene M, seguido por un procedimiento de clonación. Se secuenciaron diez clones por caso con el fin de dilucidar si las secuencias características para uno o más genotipos estaban presentes. En 19 de los 21 casos se generaron secuencias claras del gene M, en dos casos falló la amplificación de ácidos nucleicos. Siete aves fueron infectadas con el bornavirus número dos y nueve con el bornavirus 4, que representan a los genotipos predominantes en Europa. En dos casos se observó una infección mixta con bornavirus aviar 2 y 4, y un caso tenía una infección mixta con bornavirus 2 y 6. Estos resultados sugieren que el método de clonación molecular es una herramienta útil para distinguir entre eventos de infección simples o múltiples por los genotipos de bornavirus aviar.
