The role of pp38 in the pathogenesis of Marek's disease (MD) has not been fully elucidated. Previously, we reported the presence of two splice variants (Spl A and Spl B) for pp38. We also reported that the wild-type pp38 (WT), as well as the mutated pp38 (MUT), altered the oxidative phosphorylation pathway in infected cells. To determine whether the different forms of pp38 are important for the pathogenesis of MD, we generated RB-1B–based bacterial artificial chromosome (BAC) clones expressing pp38MUT, pp38Spl A, and pp38Spl B. Infectious viruses were recovered from these BAC clones in chick kidney cells (CKC). The Spl A and Spl B viruses had significantly smaller plaque sizes and replicated to a lesser degree in CKC than the WT and MUT viruses. Two in vivo experiments were conducted by inoculating 7-day-old P2a chicks with 1000 plaque-forming units of each virus. In the first experiment, chicks were sacrificed at 4, 8, 11, and 15 days postinfection (PI). WT and MUT viruses had similar viremia levels using virus isolation and quantitative real-time PCR (qPCR) assays, whereas Spl A and Spl B viruses had significantly lower viremia levels than WT and MUT viruses. In the second experiment, we showed that tumor development and MD mortality were similar in the WT- and MUT-infected chickens, with all birds MD positive at 5 wk PI. In contrast, chickens infected with Spl B and Spl A had a significantly lower MD incidence at 11 wk PI, when the experiment was terminated.

Importancia de la expresión diferencial del gene pp38 del virus de Marek en la patogénesis de la enfermedad de Marek.

El papel del gene pp38 en la patogénesis de la enfermedad de Marek (con las siglas en inglés MD) no ha sido aclarado completamente. Previamente se reportó acerca de la presencia de dos variantes alternativas de corte y empalme (Spl A y Spl B) para el gene pp38. También se informó de que el gene pp38 de tipo silvestre (WT), así como la forma mutante de pp38 (MUT), alteraron la vía de la fosforilación oxidativa en las células infectadas. Para determinar si las diferentes formas del gene pp38 son importantes para la patogénesis de la enfermedad de Marek, se generaron clones del virus RB-1B mediantes clonación en un cromosoma bacteriano artificial (BAC) que expresaban a los virus infecciosos pp38MUT, pp38Spl A y pp38Spl B. Se recuperaron partículas infecciosas a partir de estos clones BAC en cultivos de células renales de pollo (CKC). Los virus Spl A y Spl B producían placas significativamente más pequeñas y se replicaban en un grado menor en los cultivos de células renales en comparación con el virus silvestre y su forma mutante. Se llevaron a cabo dos experimentos in vivo mediante la inoculación de pollos P2a de siete días de edad con 1000 unidades formadoras de placa de cada virus. En el primer experimento, los pollos fueron sacrificados a los 4, 8, 11, y 15 días después de la infección. Los virus silvestre y mutante produjeron niveles similares de viremia que se determinaron mediante el aislamiento del virus y ensayos de PCR cuantitativos en tiempo real, mientras que los virus Spl A y Spl B mostraron niveles significativamente más bajos de viremia en comparación con los virus silvestre y mutante. En el segundo experimento, se demostró que el desarrollo de tumores y la mortalidad por la enfermedad de Marek fue similar en los pollos infectados con los virus silvestre o mutante, con todas las aves positivas a la enfermedad de Marek a las 5 semanas después de la inoculación. En contraste, los pollos infectados con los virus Spl B y Spl A mostraron una incidencia de la enfermedad de Marek significativamente menor a las once semanas después de la inoculación, cuando se concluyó el experimento.