Nine captive, clinically healthy two-toed sloths (Choloepus hoffmanni) of both genders and different ages were anesthetized at the Zoological Park of Huachipa in Peru. The anesthetic cocktail administered was composed of ketamine (2.67±0.25 mg/kg), dexmedetomidine (12±4 µg/kg) and midazolam (0.1 mg/kg), mixed in the same syringe and applied via intramuscular injection (IM). Ten minutes after initial injection, cardiac frequency, oxygen saturation, non-invasive arterial blood pressure, respiratory frequency, and rectal temperature were monitored every 10 minutes. The following parameters related to anesthetic quality were also assessed: induction time, effective period of the anesthesia, recovery time, muscle relaxation score, presence or absence of salivation, and protection reflexes. After 50 minutes of anesthesia, dexmedetomidine was reverted with atipamezole (0.22±0.05 mg/kg), administered IM. A rapid time of induction of 6±3 min was observed along with an effective period of anesthesia of 50 minutes. Recovery was rapid and without excitement. Recovery time started 8±4 min after administration of atipamezole, and total recovery was achieved at 10±4 min. A good muscle relaxation, maintenance of defense reflexes, and no salivation were observed. No significant alterations of vital functions and no significant differences (p ≤ 0.05) in relation to time of monitoring, gender or age were observed. Based on the results, this protocol could be considered as an excellent choice for pharmacological contention of two-toed sloths.
INTRODUCCIÓN
Los perezosos de dos dedos Choloepus spp. (Pilosa: Choloepodidae) presentan particularidades fisiológicas que incluyen un bajo metabolismo basal (McNab, 1985), poiquilotermismo (Britton, 1941), un estómago similar al de un rumiante (Goffart, 1971) y la posibilidad de soportar largos períodos de apnea (Irving et al., 1942). Los perezosos pueden ser contenidos e inyectados manualmente para la inmovilización mientras están descansando (West et al., 2007). Sin embargo, a pesar de su apariencia apacible, suelen ser muy agresivos y pueden causar varias lesiones al manejador.
Uno de los protocolos anestésicos utilizados en cautiverio es el uso de anestesia inhalatoria con sevoflurano, aunque la capacidad de los perezosos de permanecer en apnea por períodos de tiempo prolongados hace de esta técnica una opción muy dificultosa (Irving et al., 1942; West et al., 2007).
Los reportes del uso de combinaciones anestésicas incluyen al pentobarbital sódico usado sólo o asociado a la acepromazina (Meritt, 1972, 1974; Toole, 1972; Wallach et al., 1983). La ketamina también ha sido usada de manera aislada o en asociación a otros anestésicos como la acepromazina, el diazepam, la xilazina (Rappaport & Hochman, 1988; Gillespie, 1993; Wallace & Oppenheim, 1996; Vogel et al., 1998) o tiletamina / zolazepam (Vogel et al., 1998), y más recientemente se ha reportado con gran éxito el uso de la ketamina asociada a la medetomidina, siendo esta última antagonizada con atipamezol (Vogel et al., 1998; Hanley et al., 2008).
La combinación de la acepromazina con ketamina promueve una anestesia insatisfactoria, muy superficial y con poco relajamiento muscular (Massone, 2008). La ketamina asociada a un alfa2-agonista promueve una anestesia con buen relajamiento muscular y analgesia, pudiendo ocurrir bradicardia, y con la medetomidina también se ha reportado bradipnea (Massone, 2008). La asociación de ketamina y medetomidina usada por la vía intramuscular es considerada una excelente opción para trabajos en campo con animales de vida libre debido a la reversibilidad de la medetomidina y principalmente por presentar menos efectos deletéreos en comparación a la xilazina (Vogel et al., 1998; Hanley et al., 2008). La combinación de ketamina y midazolam es también una buena elección para inmovilizaciones de corta duración (West et al., 2007). Todas las asociaciones con ketamina, con excepción de la combinación con acepromazina, promueven anestesia disociativa de alrededor de 40 minutos de duración (Vogel et al., 1998). El uso de la asociación comercial de tiletamina / zolazepam por vía intramuscular es un protocolo seguro y efectivo para condiciones de cautiverio, pero presenta una recuperación prolongada (West et al., 2007). Promueve un anestesia profunda con buen relajamiento muscular, aunque en algunos casos puede llegar a causar depresión respiratoria (Massone, 2008). En general los perezosos pueden requerir confinamiento durante la recuperación hasta que puedan nuevamente asirse a las ramas por sus propios medios (West et al., 2007). El tiempo de recuperación depende, entre otras cosas, del protocolo empleado para la inmovilización de los animales.
La asociación de ketamina, dexmedetomidina y midazolam como protocolo de inmovilización farmacológica permite el uso de poco volumen y una fácil aplicación por la vía intramuscular. Además, esta mezcla ofrece un corto período de inducción, con buena tranquilización, buen relajamiento muscular y mínimos efectos deletéreos en las constantes fisiológicas de los animales. Otra ventaja de esta combinación de anestésicos es que se puede lograr una recuperación rápida y sin accidentes luego de la reversión del alfa2- agonista, permitiendo la rápida liberación de los animales una vez concluido el procedimiento deseado. Sin embargo, el uso de la asociación de ketamina, dexmedetomidina y midazolam, y su reversión con atipamezol, no ha sido descrita en perezosos. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue probar la efectividad, practicidad de uso y seguridad de esta asociación como protocolo de inmovilización farmacológica para perezosos de dos de dos Choloepus hoffmanni.
MATERIALES Y MÉTODOS
Animales
Se emplearon nueve ejemplares de perezosos de dos dedos de distintas edades (siete adultos y dos jóvenes), de ambos sexos (siete y dos machos), clínicamente sanos, con peso promedio de 6,8±2,4 kg. Estos animales conformaban la totalidad de la colección de perezosos mantenidos en cautiverio en el Parque Zoológico Huachipa en Lima, Perú.
Drogas anestésicas
Se emplearon 2,67±0,25 (2,5–3) mg/kg de clorhidrato de ketamina (Ketaminol 10, Intervet International B.V., European Union), 12±4 (10–20) µg/ kg de clorhidrato de dexmedetomidina (Dexdomitor, Orion Pharma, Espoo, Finlandia) y 0,1 mg/kg de maleato de midazolam (Midanex, Laboratorios AC FARMA S.A., Lima, Perú). Para la reversión de los efectos de la dexmedetomidina se empleó 0,22±0,05 mg/kg de clorhidrato de atipamezol (Antisedan, Orion Pharma, Espoo, Finlandia).
Procedimientos generales
Los animales fueron inmovilizados por contención manual. En todos los ejemplares, el protocolo anestésico se aplicó mediante inyección en la región del muslo, correspondiente a los músculos bíceps femoral y semitendinoso, utilizando una única jeringa conteniendo la asociación. La inducción se realizó en un lugar silencioso, evitando estímulos externos que pudieran alterar el tiempo y la calidad de la inducción. La temperatura ambiental durante la realización del procedimiento fue de 24,1 a 25,1°C. La humedad relativa ambiental en el mismo recinto osciló entre 67 y 76% durante todo el procedimiento.
Luego de aproximadamente 50 minutos de la aplicación del protocolo anestésico inicial, fue realizada la reversión de los efectos de la dexmedetomidina con atipamezol por la vía intramuscular. Todos los ejemplares fueron sometidos a examen físico-clínico, radiológico, ecográfico abdominal y colecta sanguínea por punción de la vena femoral como parte del manejo sanitario de rutina de los animales de la colección del zoológico.
Durante la anestesia fueron evaluados los siguientes parámetros: frecuencia cardíaca (FC) mediante auscultación directa con estetoscopio pediátrico; frecuencia respiratoria (FR) por conteo visual; temperatura rectal (TR) con termómetro-higrómetro ambiental digital (Modelo 63-1032, RadioShack, Fort Worth, USA); presión arterial no invasiva (presión arterial sistólica [PAS], presión arterial media [PAM] y presión arterial diastólica [PAD]) mediante colocación de Doppler vascular (Modelo DV 610, MEDMEGA, São Paulo, Brasil) y brazalete de tensiómetro pediátrico (CRITIKON CUFF N°5, Johnson & Johnson Medical Inc., Arlington, USA) sobre la arteria braquial en el brazo del animal conectado a un esfingomanómetro pediátrico (Riester Minimus III pediátrico, Riester, Jungingen, Alemania). Además se tomaron datos de Saturación de Oxigeno (SatO2) con pulsoxímetro (Modelo Jerry II-AA, Shanxi Jerry Medical Instrument Co. Ltd., Taiyuan, China) y utilizando sensor de pinza en la lengua de todos los animales (FIG. 1).
También se evaluaron el relajamiento muscular (0 sin relajamiento; 1 leve; 2 moderado, 3 óptimo), presencia o ausencia de reflejo palpebral lateral (RPL), medial (RPM) y de deglución (RD), y el grado de sedación (0 sin sedación; 1 leve sedación; 2 óptima sedación). La toma de datos se realizó cada 10 minutos después de la aplicación del protocolo anestésico. Después de transcurridos 50 minutos de anestesia hábil, se les aplicó atipamezol para revertir los efectos de la dexmedetomidina. Fueron evaluados también los aspectos clínicos relacionados a la calidad anestésica como: calidad de inducción (suave ïcon excitación); grado de sedación; calidad del piano anestésico (relajamiento muscular, presencia de reflejo palpebral medial y lateral y posición del globo ocular); el tiempo en minutos de recuperación partial luego de la aplicación del antagonists; la calidad de recuperación (suave o con excitación) y el tiempo de recuperación total.
Análisis estadísticos
Los resultados cuantitativos de todos los parámetros fisiológicos obtenidos fueron descritos en datos de media±desviación estándar (DS) y analizados mediante la prueba de t de Student para muestras independientes para las variables de tiempo de anestesia de los animales anestesiados. Se utilizó el programa estadístico SPSS (versión 15.0 para Windows, SPSS Inc., Chicago, USA). Los valores de p ≤0.05 fueron considerados significativos. No se realizaron pruebas estadísticas entre sexos y edades por el bajo número muestral.
RESULTADOS
La inducción fue rápida (6±3 min) y no se observó ningún cuadro de excitación durante la sedación. El protocolo anestésico permitió mantener un período efectivo de anestesia de 50 min. El grado de sedación fue óptimo en todos los animales a partir de los primeras 10 min hasta aproximadamente los 50 min después de la aplicación del protocolo. Se observó un inicio de recuperación a los 8±4 min luego de la aplicación del atipamezol, y una recuperación total desde los 10±4 min de la misma. Se produjo una excelente relajación muscular en todos los ejemplares anestesiados, se preservaron los reflejos de protección (reflejo palpebral lateral y medial, y de deglución) y no se observó salivación excesiva en ninguno de los casos.
Los valores de FC durante el estudio no variaron significativamente durante los experimentos, obteniéndose datos de 59±16 latidos por minuta (lpm) en los primeras 10 min y de 54±18 lpm en los 50 min finales (TABLA 1, FIG. 2). No se observaron diferencias marcadas en cuanto a las medias de FC entre ambos sexos (TABLA 2) ni entre juveniles y adultos (TABLA 3).
Se obtuvieron valores FR que variaron en media de 13±3 respiraciones por minuto (rpm) en los primeras 10 min y fueron disminuyendo ligeramente hasta los 12±2 rpm en los últimos 50 min (FIG. 2). La FR fue similar en machos y hembras, y en juveniles y adultos (TABLA 2, TABLA 3).
Se observó un valor promedio de SatO2 de 93±2%, obteniendo valores que oscilaron entre 90 y 97% (FIG. 2), siendo que no se encontró variaciones significativas entre el inicio y el final del procedimiento para este parámetro. Tampoco se verificaron diferencias marcadas entre ambos sexos o según el rango de edades (TABLA 2, TABLA 3).
No se registraron alteraciones significativas de TR a lo largo del procedimiento anestésico, siendo que los valores promedios variaron de 31,8±0,8 a 32,5±0,7°C, respectivamente desde el inicio al final del procedimiento (FIG. 2). No se observaron diferencias marcadas entre sexos ni tampoco en relación a la edad de los perezosos (TABLA 2, TABLA 3).
TABLA 1.
Parámetros fisiológicos en perezosos de dos dedos Choloepus hoffmanni anestesiados con ketamina/dexmedetomidina/ midazolam. Los valores están expresados como media±desvío estándar (DS).
TABLA 2.
Comparación de parámetros fisiológicos en perezosos de dos dedos Choloepus hoffmanni anestesiados con ketamina/ dexmedetomidina/midazolam según el sexo. Los valores están expresados como media±desvío estándar (DS).
TABLA 3.
Comparación de parámetros fisiológicos en perezosos de dos dedos Choloepus hoffmanni anestesiados con ketamina/ dexmedetomidina/midazolam según la edad. Los valores están expresados como media±desvío estándar (DS).
No fue posible la medición de presión arterial de tres animales en todos los momentos de monitoreo debido a problemas técnicos, por lo que estos valores aislados no se tomaran en consideración para la evaluación final de esta constante. En general los valores de PAM no presentaron alteraciones significativas durante el período trans-anestésico (FIG. 2), verificándose un valor promedio de 100±4 mmHg (TABLA 1). Tampoco se observó ninguna diferencia notable para los valores de PAM en cuanto al sexo (TABLA 2) y a la edad de los animales (TABLA 3).
DISCUSIÓN
El período de inducción promedio obtenido en este estudio fue similar a los 6,33 min reportados en animales sedados previamente con ketamina y medetomidina (K/M) (Vogel et al., 1998). Sin embargo, el tiempo de inducción fue mayor a los reportados con otros protocolos anestésicos como ketamina/xilazina (K/X; 3,99 min), ketamina/acepromazina (K/A; 4,13 min) o tiletamina / zolazepam (T/Z; 2,8 min) (Vogel et al., 1998). La asociación de ketamina-dexmedetomidina-midazolam (K/D/Mi) presentó mejores características tanto en la sedación como en el relajamiento muscular que las observadas en trabajos previos con perezosos (Vogel et al., 1998, Hanley et al., 2008). Además, el tiempo de recuperación en este trabajo (10 min) fue notablemente menor comparado con los tiempos de recuperación observados en animales sedados con K / A (29 min) y especialmente con T / Z (76 min) (Vogel et al., 1998), siendo que en algunos casos esta recuperación puede demorar hasta 3 hs (Gilmore et al., 2000). Las dosis de ketamina estuvieron dentro del rango de dosis empleado en estudios previos con C. didactylus (Vogel et al., 1998) y C. hoffmanni (Hanley et al., 2008).
La dosis de dexmedetomidina empleada en el estudio fue menor que de las dosis empleadas de medetomidina en trabajos previos con el mismo génera Choloepus (Vogel et al. 1998; Hanley et al. 2008). La dexmedetomidina se emplea normalmente en la mitad de la dosis de medetomidina para obtener el mismo grado de sedación y tranquilización (Otero, 2005), pero produciendo menos efectos deletéreos debido a las bajas dosis que ésta se emplea. En general los efectos producidos por la dexmedetomidina a nivel cardiorrespiratorio estuvieron dentro de las alteraciones descritas para este fármaco en otras especies, incluyendo bradicardia y bradipnea leves (Hatschbach et al., 2006). Sin embargo, no se registraron alteraciones de consideración en la presión arterial de ninguno de los animales anestesiados. Considerando que el factor estrés podría limitar la acción de los alfa2-agonistas debido a la ocupación de los receptores alfa1 y alfa2 provocada por la liberación de adrenalina y noradrenalina como respuesta al estrés, el uso asociado del midazolam en combinación con ketamina y dexmedetomidina proporciona una buena y rápida inducción y un excelente relajamiento muscular, como ocurre cuando el mismo fármaco es adicionado a la combinación de la ketamina con la medetomidina (Holz, 2007).
En cuanto a los paramátras fisiológicos, los valores de FC obtenidos durante el experimenta se mantuvieron dentro de los valores normales reportados para perezosos (West et al., 2007). Similares valores fueron descritos en estudios anteriores con K/A en C. didactylus (Vogel et al., 1998). No se registraron caídas marcadas de la FC como a quellas reportadas en Choloepus spp. anestesiados con K/X, K/M y T/Z (Vogel et al., 1998; Hanley et al., 2008). Tampoco se observaron variaciones considerables de la PAM ni al inicio, que corresponderían a un efecto alfa2-agonista como ocurre normalmente en animales anestesiados con medetomidina o xilazina o la propia dexmedetomidina (Massone, 2008). Estas variaciones tampoco se observaron en C. hoffmanni anestesiados con K/M (Hanley et al., 2008), lo cual podría deberse a las bajas dosis de alfa2-agonistas empleadas durante ambos estudios. La ausencia de alteraciones en la FC y la PAM se tradujo en una mejor calidad anestésica, debido principalmente a que se mantuvo una buena irrigación de los tejidos, incluyendo órganos vitales como el cerebro y los riñones; siendo que en un cuadro de hipotensión severa el tejido neuronal sufre daños irreversibles debido principalmente a la hipoxia tecidual (Nielsen, 1999), y a nivel renal se reduce el flujo sanguíneo renal y la tasa de filtración glomerular (Massone, 2008), situación que disminuiría considerablemente la excreción de los fármacos y aumentaría el tiempo de recuperación anestésica.
Los valores de FR registrados durante el experimento también estuvieron dentro del rango normal descrito para perezosos (West et al., 2007). No se observé la disminución continua de la FR a lo largo de la anestesia, como ocurrió en estudios previos usando la asociación K/M (Vogel et al., 1998; Hanley et al., 2008). Se registraron mejores valores de SatO2 que los descritos en C. didactylus anestesiados con T/Z y K/M, donde se reportaron animales con hipoxemia (SatO2 ≤ 80%), siendo que el menor valor de oxigenación se reportó en aquellos animales anestesiados con T/Z (Vogel et al., 1998). Por otro lado, se obtuvieron resultados similares a los descritos por Hanley et al. (2008) empleando K/M en C. hoffmanni. Tanto la estabilidad de los valores de FR y de SatO2 demuestran que los padrones de ventilación y oxigenación de los tejidos y órganos en general se mantienen estables y no se ven afectados por la combinación farmacológica empleada en el estudio. Esta condición permitiría al organismo de los animales responder mejor al estrés metabólico producido tanto por el procedimiento de captura como por la propia aplicación de los fármacos.
El manejo de la temperatura ambiental durante el trabajo no permitió que hubiera pérdidas de temperatura significativas en ninguno de los animales anestesiados. Bajas temperaturas pueden reducir o bloquear el metabolismo celular, resultando en la supresión de procesos metabólicos vitales (Nielsen, 1999) entre los que se incluyen los procesos de metabolización y consecuente eliminación de los fármacos. Durante el estudio no se registraron variaciones significativas en la TR en los diferentes tiempos de monitoreo, registrándose apenas un leve aumento de la temperatura entre el inicio y el final del procedimiento, por lo que el metabolismo de los fármacos no se vio afectado en ninguno de los animales. Estos resultados contrastan con los de Vogel et al. (1998), quienes describieron una pequeña caída de la temperatura entre el inicio y el final de la anestesia en C. didactylus anestesiados en vida libre con K/M, K/X, K/A y T/Z. Por orra lado, los resultados de TR en el presente estudio fueron más próximos a los reportados en un estudio realizado también en un ambiente con temperatura ambiental controlada con C. hoffmanni anestesiados con K/M (Hanley et al., 2008).
CONCLUSIONES
La asociación de la ketamina, la dexmedetomidina y el midazolam es una excelente opción para la contención farmacológica y anestesia de perezosos de dos dedos. Esta combinación puede ofrecer una inducción rápida y segura, sin alteraciones considerables de los parámetros fisiológicos, y mostrando además una recuperación bastante rápida luego de la aplicación del atipamezol y sin la presencia de efectos indeseables durante la misma, como la hiperexcitación. El midazolam usado en esta asociación no requeriría ser antagonizado con flumazenil debido a que se emplea en dosis muy bajas y su metabolismo y excreción ocurre a los pocos minutos luego de su aplicación en condiciones normales, siendo que sus efectos habrían desaparecido casi en su totalidad antes de la aplicación del atipamezol. El control adecuado de la temperatura ambiental es un factor clave en el éxito de la anestesia de los perezosos debido a que éstas dependen directamente de la temperatura ambiental para contralar la propia, factor que debe considerarse al trabajar con animales de vida libre. Basado en los resultados obtenidos se considera este protocolo como una excelente opción para la contención farmacológica de perezosos de dos dedos.
