Mycoplasma gallisepticum (MG) is an important avian pathogen causing significant economic losses within the poultry industry. In an effort to develop tools to aid in MG research and diagnostics, we have compared sequences of the attenuated MG vaccine strain ts-11 to those of commonly used pathogenic challenge strains in search of a simple means of differentiation. Via gapA sequence alignments and comparisons, we have identified and designed primers facilitating strain differentiation. When applied to conventional polymerase chain reaction (PCR) assay at low annealing temperature, the primer sets allow for the differentiation of MG attenuated vaccine strains ts-11 as well as the attenuated MG vaccine strain 6/85 from the commonly utilized MG challenge strains R_low, R, and S6. Conventional PCR differentiation is based on the visualization of sole products with the attenuated MG strains ts-11 and 6/85 and the lack of the corresponding products from MG strains R_low, R, and S6. When applied to MG strain F, product visualization varies with the applied primer set. The differentiation of MG strains ts-11 and 6/85 from the pathogenic challenge strains was also accomplished via real-time analyses, however, the primer sets were not able to differentiate MG strains ts-11 and 6/85 from selected MG field isolates.

Nota de Investigación—Diferenciación mediante reacción en cadena por la polimerasa de las cepas vacunales de Mycoplasma gallisepticum ts-11 y 6/85 de las cepas de Mycoplasma gallisepticum comúnmente utilizadas para desafío.

El Mycoplasma gallisepticum es un patógeno aviar importante que causa pérdidas económicas significativas en la industria avícola. En un esfuerzo para desarrollar herramientas que ayuden en la investigación y diagnóstico del Mycoplasma gallisepticum, se compararon las secuencias de la cepa atenuada de Mycoplasma gallisepticum ts-11 con las de cepas patogénicas comúnmente utilizadas para desafío buscando formas simples para diferenciarlas. Mediante alineamientos de secuencias y comparaciones del gen gapA, se identificaron y diseñaron iniciadores que facilitan la diferenciación de las cepas. Cuando se utilizan en una prueba convencional de reacción en cadena por la polimerasa, los iniciadores permiten la diferenciación de las cepas vacunales atenuadas de Mycoplasma gallisepticum ts-11 y 6/85, de las cepas de Mycoplasma gallisepticum R_low, R, y S6, comúnmente utilizadas para desafíos. La diferenciación mediante la prueba convencional de reacción en cadena por la polimerasa se basa en la detección de un producto individual con las cepas atenuadas ts-11 y 6/85 y la carencia de los productos correspondientes con las cepas de Mycoplasma gallisepticum R_low, R, y S6. Cuando los iniciadores se utilizan con la cepa F de Mycoplasma gallisepticum la visualización es variable. La diferenciación de las cepas de Mycoplasma gallisepticum ts-11 y 6/85 de las cepas de desafío, también se realizó mediante análisis en tiempo real, sin embargo, los iniciadores no fueron capaces de diferenciar las cepas Mycoplasma gallisepticum ts-11 y 6/85 de cepas de campo seleccionadas de Mycoplasma gallisepticum.

Abbreviations: C_T = threshold cycle; FMS = Frey's media with swine serum; MG = Mycoplasma gallisepticum; NTC = no template control; OD = optical density; PBS = phosphate-b