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In November 2010, an outbreak of avian influenza (AI) due to the H5N2 subtype virus occurred in a turkey breeder farm in northern Manitoba, Canada. The only clinical signs observed were depression, decrease in food consumption, and loss of egg production. The hemagglutinin (HA) cleavage (HA₀) site of the isolated H5N2 virus was PQRETR/GLF, consistent with low pathogenic AI viruses. The intravenous pathogenicity index of this virus was zero. Whole-genome sequencing of two isolates that originated from two different barns was performed, and both isolates had 100% identical protein sequence in PB2, HA, NP, M1, M2, NS1, and NS2. The remaining gene segments (PB1, PA, and NA) had a single amino-acid difference when compared with each other. The nucleotide and protein sequences of eight gene segments from both isolates showed 99 or greater identity with other AI viruses that have been circulating in free-living aquatic birds in Canada and the United States within the last 10 yr. Phylogenetic analysis of the HA and neuraminidase (NA) gene segments showed that these viruses are closely related to other H5 strains that have been isolated from Manitoba and other parts of Canada. Serologic testing of archived serum samples collected from these turkeys a week before the outbreak showed no evidence of AI infection. In addition, other farms that were located within 3 km radius from the infected farm and farms that had epidemiologic connection with the farm also tested negative for the presence of H5N2 AI virus or antibody. This indicates that the virus might have been introduced to the farm from wild aquatic birds only a short time before detection. Results of this study highlight the importance of early detection and the significance of ongoing Canada-wide surveillance of AI in domestic poultry as well as in wild aquatic birds/ducks.

Caracterización de un virus de influenza aviar de baja patogenicidad H5N2 aislado de una parvada de pavos reproductores en Manitoba, Canadá.

En noviembre del 2010, un brote de influenza aviar (IA) ocasionado por un virus subtipo H5N2, ocurrió en una granja de pavos reproductores en el norte de Manitoba, Canadá. Los únicos signos clínicos observados fueron depresión, disminución en el consumo de alimento, y baja en la producción de huevos. El sitio de disociación (HA₀) de la hemaglutinina (HA) del virus H5N2 fue PQRETR/GLF, que es consistente con los virus de influenza aviar de baja patogenicidad. El índice de patogenicidad intravenosa de este virus fue de cero. Se realizó la secuenciación del genoma completo de dos aislamientos que se originaron a partir de dos casetas diferentes, y ambos aislamientos mostraron una identidad del 100% en las secuencia de la proteína PB2, HA, NP, M1, M2, NS1, y NS2. Los segmentos de los genes restantes (PB1, PA, y NA) mostraron diferencias en aminoácidos simples cuando se compararon entre ellos. Las secuencias de nucleótidos y aminoácidos de los ocho segmentos genéticos de los dos aislamientos identidades de 99% o mayores con otros virus de influenza aviar que han estado circulando en las aves acuáticas que viven en libertad en Canadá y en los Estados Unidos en los últimos 10 años. El análisis filogenético de los segmentos de los genes HA y la neuraminidasa (NA) mostró que estos virus están estrechamente relacionados con otras cepas H5 que han sido aisladas en Manitoba y otras partes de Canadá. Las pruebas serológicas con muestras de suero de estos pavos que estaban archivadas una semana antes de que el brote no mostraron evidencia de infección por influenza aviar. Además, otras granjas que se encontraban a menos de tres kilómetros de la granja infectada y granjas que tenía relación epidemiológica con esta granja afectada también fueron negativas para la presencia del virus de influenza aviar H5N2 o a sus anticuerpos. Esto indica que el virus pudo haber sido introducido a la granja por aves acuáti

Ring-necked pheasants raised on propagation farms can be severely parasitized with Syngamus trachea (gapeworm) and other parasitic worms. Fenbendazole is a highly effective benzimidazole-class anthelmintic that is not currently approved for game bird species in the United States. The objective of this work was to provide target animal safety data to support a label claim for fenbendazole in pheasants at 100 parts per million (ppm) in the feed for 7 consecutive days. Demonstration of safety in young pheasants and a separate demonstration of reproductive safety in adult birds were required. In the young bird study, 160 Chinese ring-necked pheasants (Phasianus colchicus, 80 males and 80 females) were fed a commercial game bird starter ration containing no antibiotics, growth promoters, or coccidiostats until day 0 of the study (approximately 21 days of age). On day 0 the birds were placed on their respective study diets containing fenbendazole at 0, 100, 300, and 500 ppm for 21 days (three times the normal treatment duration). Clinical observations were recorded twice daily. Feed consumption, feed conversion rate, and body weights were determined for each pen. Three birds from each pen were randomly selected for necropsy, histopathology, and clinical pathology. Birds were carefully examined for feathering abnormalities immediately following euthanasia. The remaining birds in each pen were submitted for drug concentration analysis so that concentrations (for low vs. high treatment levels) could be correlated with clinical observations, clinical pathology, and histologic findings. There no morbidities or mortalities after study day −1. There were no statistically significant treatment-related differences in feed consumption, feed conversion rates, body weights, serum biochemistry profiles, hematologic profiles, gross necropsy findings, histopathologic examination, and feathering. Allowable liver and muscle concentrations of fenbendazole sulfone in turkeys are 6 and 2 ppm, respectively, with a 6-hr feed withdrawal. Analysis of fenbendazole concentrations in kidney, liver, leg/thigh, and breast muscle and skin with associated fat revealed that, even at the highest dose level used and with no feed withdrawal, fenbendazole concentrations were relatively low in these tissues. These findings indicate that fenbendazole has a relatively wide margin of safety in young pheasants and that the proposed dose of 100 ppm in the feed for 7 consecutive days is well within the margin of safety. In the reproductive safety study, two large game bird farms fed fendbendazole at 100 ppm for 7 days and collected data on hatching percentage of pheasant eggs before and after treatment. Reproductive performance in hen pheasants was not adversely affected.

Seguridad de Fenbendazol en faisanes comunes (Phasianus colchinus).

Los faisanes comunes criados en granjas pueden ser severamente parasitados con Syngamus trachea (con sinonimia en inglés gapeworm) y otros helmintos parásitos. El fenbendazol es un antihelmíntico de la clase de los bencimidazoles, muy efectivo que no está aprobado actualmente para las especies de aves de caza en los Estados Unidos. El objetivo de este trabajo fue proporcionar datos sobre la seguridad en estas aves para apoyar una solicitud de autorización del uso de fenbendazol en faisanes con una dosis de 100 ppm en el alimento durante siete días consecutivos. Se requiere de la demostración de la seguridad en faisanes jóvenes y una demostración independiente de seguridad en la reproducción de las aves adultas. En el estudio de aves jóvenes, 160 faisanes comunes (Phasianus colchicus, 80 machos y 80 hembras) fueron alimentados con una ración de iniciación para aves de caza comercial que no contenía antibióticos, promotores del crecimiento, o coccidiostatos hasta el día cero del estudio (aproximadamente a los 21 días de edad). En el día cer

Aspergillosis, a disease caused by infection with Aspergillus spp., is a common cause of death in birds globally and is an irregular cause of mortality of captive kiwi (Apteryx spp.). Aspergillus spp. are often present in rotting plant material, including the litter and nesting material used for kiwi in captivity. The aim of this study was to survey nocturnal kiwi houses in New Zealand to assess the levels of Aspergillus currently present in leaf litter. Samples were received from 11 nocturnal kiwi houses from throughout New Zealand, with one site supplying multiple samples over time. Aspergillus was isolated and quantified by colony counts from litter samples using selective media and incubation temperatures. Isolates were identified to the species level by amplification and sequencing of ITS regions of the ribosomal. Aspergillus spp. were recovered from almost every sample; however, the levels in most kiwi houses were below 1000 colony-forming units (CFU)/g of wet material. The predominant species was Aspergillus fumigatus, with rare occurrences of Aspergillus niger, Aspergillus nidulans, and Aspergillus parasiticus. Only one site had no detectable Aspergillus. The limit of detection was around 50 CFU/g wet material. One site was repeatedly sampled as it had a high loading of A. fumigatus at the start of the survey and had two recent clinical cases of aspergillosis diagnosed in resident kiwi. Environmental loading at this site with Aspergillus spp. reduced but was not eliminated despite changes of the litter. The key finding of our study is that the background levels of Aspergillus spores in kiwi nocturnal houses in New Zealand are low, but occasional exceptions occur and are associated with the onset of aspergillosis in otherwise healthy birds. The predominant Aspergillus species present in the leaf litter was A. fumigatus, but other species were also present. Further research is needed to confirm the optimal management of leaf litter to minimize Aspergillus spore counts. However, in the interim, our recommendations are that leaf litter should be freshly collected from areas of undisturbed forest areas and spread immediately after collection, without interim storage.

Aislamiento e identificación de Aspergillus spp. de alojamientos nocturnos de kiwi marrón (Apteryx mantelli) en Nueva Zelanda.

La aspergilosis, enfermedad causada por la infección con Aspergillus spp., es una causa común de muerte en las aves a nivel mundial y es una causa no regular de mortalidad de kiwis en cautiverio (Apterix spp.). El Aspergillus spp. está a menudo presente en la descomposición de la material vegetal , incluyendo la cama y el material utilizado para la anidación del kiwi en cautiverio. El objetivo de este estudio fue examinar los alojamientos nocturnos de kiwis en Nueva Zelanda para evaluar los niveles de Aspergillus actualmente presentes en la cama de hojas. Se recibieron muestras de 11 alojamientos nocturnos de kiwi de toda Nueva Zelanda, con un sitio que suministró múltiples muestras con el tiempo. Se aisló y se cuantificó Aspergillus por recuento de colonias de las muestras de cama usando medios selectivos y temperaturas de incubación. Los aislamientos fueron identificados a nivel de especie mediante amplificación y secuenciación de regiones ribosomales ITS. Se recuperó Aspergillus spp. de casi todas las muestras, sin embargo, los niveles en la mayoría de los alojamientos de kiwi estaban por debajo de las 1000 unidades formadoras de colonias (UFC )/g de materia húmeda. La especie predominante fue Aspergillus fumigatus, con presentaciones poco frecuentes de Aspergillus niger, Aspergillus nidulans y Aspergillus parasiticus. Sólo un sitio no mostró Aspergillus detectable. El límite de

The present study describes an experimental infection model for avian pathogenic Escherichia coli (APEC)-induced egg peritonitis in layer chickens. First, a pilot study which consisted of two separate experiments was carried out to compare two routes of inoculations of APEC to induce peritonitis and to examine if the presence of egg yolk in the peritoneum would facilitate APEC-induced peritonitis. This study showed that the presence of egg yolk in the peritoneum facilitated the development of egg peritonitis when the APEC was inoculated via the intra-uterine (IU) route. Based on the results of the pilot study, 56-wk-old white leghorn hens were divided into two groups of five chickens, Group G (inoculated with E. coli APECO78 strain) and Group H (control). Both groups were inoculated with 2–3 ml of egg yolk via the intraperitoneal route (IP). Subsequently, hens in Group H were inoculated with only egg yolk whereas the hens in Group G were inoculated with 1 × 10⁹ colony-forming units of APECO78 bacteria via the IU route. Parameters such as mortality, clinical signs (anorexia, depression, and egg production efficiency), gross lesion scores, bacterial loads in internal organs, and histopathology of ovary and oviduct were assessed to evaluate the success of the infection model. Group G showed 40% acute mortality, severe depression, and anorexia with markedly reduced egg production and developed peritonitis-associated lesions such as accumulation of yellowish caseous fluid in the peritoneum, salpingitis, and oophoritis. Histopathologically, ovarian and oviduct tissues from group G exhibited severe inflammatory changes such as infiltration of mononuclear cells and edema. Group G also showed significant bacterial loads in the peritoneum, ovary, and oviduct. Interestingly, deceased birds from group G had also developed mild perihepatitis and pericarditis with heavy bacterial loads in the internal organs. On the other hand, group H birds did not exhibit any of the clinical signs and remained healthy until the end of the experiment. To summarize, our results demonstrate that IP administration of egg yolk followed by IU inoculation of APECO78 induced peritonitis in laying hens. Experimental infection models are often required to understand the mechanisms of disease pathogenesis. Therefore, the present infection model will aid in the studies of pathogenesis of layer peritonitis caused by APEC and in evaluating vaccine candidates to control the disease.

Modelo de infección experimental para la peritonitis por yema de huevo asociada a Escherichia coli en gallinas de postura.

El presente estudio describe un modelo de infección experimental para la peritonitis por yema de huevo inducida por cepas patógenas para las aves de Escherichia coli (APEC) en gallinas ponedoras. En primer lugar, se llevó a cabo un estudio piloto que consistía en dos experimentos separados para comparar dos rutas de inoculación de E. coli patógena en aves para inducir peritonitis y para examinar si la presencia de la yema de huevo en el peritoneo facilitaba la peritonitis inducida por E. coli. Este estudio mostró que la presencia de yema de huevo en el peritoneo facilitó el desarrollo de peritonitis cuando E. coli se inoculó a través de la ruta intrauterina (IU). Con base en los resultados del estudio piloto, gallinas de 56 semanas de edad se asignaron a dos grupos de cinco pollos, el grupo G (inoculado con la cepa APECO78 de E. coli) y el Grupo H (control). Ambos grupos se inocularon con 2 a 3 ml de yema de huevo a través de la vía intraperitoneal. Posteriormente, las gallinas del Grupo H se inocularon sólo con yema de huevo mientras que las gallinas en el Grupo G se inocularon con 1 × 10⁹ unidades formadoras de colonias de la cepa APECO78 a través de la ruta intrauterina. Se evaluaron parámetros como mortalidad, signos clínicos (an

Endogenous retroviral elements (ERVs) are prolific components of the genomes of complex species, typically occupying more sequence space than do essential, protein-encoding genes. Much of what we know today about the structure and function, as well as the evolution and pathogenic potential, of ERVs was fleshed out over several decades during the last century using the avian leukosis virus subgroup E–related (ALVE) family of endogenous retroviruses of chickens as a model system. A critical enabling factor in the elucidation of ALVE structure and function is the ability to detect and unambiguously identify specific ALVE proviral elements and to develop accurate element profiles for individual chickens under study. Currently, the most common approach for ALVE locus detection involves element-specific PCR assays carried out using primers that target host DNA near the insertion site of the provirus (i.e., the upstream and downstream flanks of the unoccupied site). Here we describe a new approach for proviral detection that exploits restriction enzyme sites in flanking DNA to develop ALVE element profiles more rapidly than with assays currently in use. Moreover, unlike element-specific PCR tests, the “profiling” assay detects novel ALVEs for which insertion sites have not yet been identified as well as previously characterized elements.

Ensayo rápido de perfiles para provirus del virus de la leucosis aviar subgrupo E en pollos.

Los elementos retrovirales endógenos (ERV) son componentes prolíficos de genomas de especies complejas, por lo general ocupan más espacio en las secuencias en comparación con los genes que codifican para proteínas esenciales. Mucho de lo que actualmente se conoce sobre la estructura y función, así como la evolución y potencial patógeno de los ERV se han desarrollado en varias décadas del siglo pasado utilizando como modelo a los retrovirus endógenos de pollos que están relacionados con la familia del virus de la leucosis aviar E. Un factor crítico que permite la elucidación de la estructura y la función de los virus de la leucosis aviar E es la capacidad de detectar e identificar sin ambigüedad elementos provirales específicos del virus de la leucosis aviar E y para desarrollar perfiles precisos de elementos individuales para los pollos bajo estudio. Actualmente, el método más común para la detección de locus del virus de la leucosis aviar E implica ensayos de PCR específicos para cada elemento que se llevan a cabo utilizando iniciadores que se dirigen al ADN del huésped cerca del sitio de inserción del provirus (es decir, con orientación a los extremos 5′ y 3′ del sitio desocupado). En este trabajo se describe un nuevo enfoque para la detección proviral que utiliza sitios de enzimas de restricción en el ADN adyacente para desarrollar de forma más rápida, perfiles de elementos del virus de la leucosis aviar E en comparación con los ensayos actualmente en uso. Por otra parte, a diferencia de las pruebas de PCR para elementos específicos, los ensayos “de perfiles” detectan nuevos virus de la leucosis aviar E para los cuales sus sitios de inserción aún no han sido identificados, así como elementos previamente caracterizados.

This study was undertaken to observe the prevalence, serogroup, avian pathogenic Escherichia coli (APEC)-associated virulence gene, randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) pattern, and antibiotic resistance genes of E. coli in backyard layers and their environment in India. From the 360 samples of healthy layers and their environment, 272 (75.5%) E. coli were isolated. The majority (28.67%) of them were untypeable. Among the studied virulence genes (papC, tsh, iucC, astA), 52 (14.32%) isolates were found to possess astA, including the isolates from the drinking water of the birds (4/272, 1.47%). These strains belonged to 18 different serogroups. Most of the isolates were typeable by RAPD and they produced different patterns. Phenotypic resistance of the isolates was most frequently observed to erythromycin (95.83%), chloramphenicol (87.52%), and cotrimoxazole (78.26%). None of the isolates was found to possess extended-spectrum beta-lactamases (bla_TEM, bla_SHV, bla_CTX-M) or quinolone resistance (qnrA) genes by PCR. The present study was the first attempt in India to assess APEC distribution in backyard poultry production.

Repertorio de virulencia, caracterización y análisis de los patrones de resistencia a los antibióticos de Escherichia coli aisladas de gallinas de postura de traspatio y de su medio ambiente en la India.

Este estudio se realizó para determinar la prevalencia, el serogrupo, los genes asociados a virulencia de Escherichia coli patógena para las aves (APEC), los patrones de ADN polimórfico amplificado aleatoriamente (RAPD), y los genes de resistencia a los antibióticos de E. coli en gallinas de traspatio y su ambiente en la India. De las 360 muestras de gallinas sanas y de su ambiente, se aislaron 272 cepas de E. coli (75.5%). La mayoría (28.67%) de ellas no fueron tipificables. Entre los genes de virulencia estudiados (papC, tsh, iucC, astA), se encontró que 52 aislamientos (14.32%) poseían el gene astA, incluyendo los aislamientos de agua de bebida de las aves (4/272, 1.47%). Estas cepas pertenecían a 18 serogrupos diferentes. La mayoría de los aislamientos fueron tipificables mediante RAPD y produjeron diferentes patrones. La resistencia fenotípica de los aislamientos se observó con mayor frecuencia contra eritromicina (95.83%), cloranfenicol (87.52%), y contra cotrimoxazol (78.26%). Se encontró mediante PCR que ninguno de los aislamientos poseía genes de un espectro extendido de beta-lactamasas (bla_TEM, bla_SHV, bla_CTX-M), o resistencia contra quinolonas (qnrA). El presente estudio es el primer intento en la India para evaluar la distribución de E. coli patógena para la producción de aves de traspatio.

The adjuvant activity of chitosan (CS) and calcium phosphate (CAP) particles was studied following intranasal (mucosal) administration to commercial chickens with inactivated Newcastle disease virus (NDV) vaccine. After three vaccinations with inactivated NDV in combination with CS or CAP an increase in antibody titers in blood and mucosal samples in chickens was observed when compared with the administration of NDV antigen only. A lower level of humoral immunity was observed in broiler chickens compared to layer-type birds. The CS-based vaccine demonstrated higher antigenic and protective activity following lethal challenge than the vaccine containing CAP. Because CS particles efficiently changed mucosal and humoral immunity and protective activity, CS may in the future be considered for use as a potential adjuvant for production of vaccines for poultry.

Efectos adyuvantes del quitosano y de partículas de fosfato de calcio en una vacuna inactivada contra la enfermedad de Newcastle.

Se estudió la actividad adyuvante del quitosano (CS) y de partículas de fosfato de calcio (CAP) después de una administración intranasal (mucosa) en pollos comerciales con una vacuna inactivada contra el virus de la enfermedad de Newcastle. Después de tres vacunaciones con la vacuna inactivada en combinación con el quitosano o con el fosfato de calcio, se observó un aumento en los títulos de anticuerpos en las muestras de sangre y de las mucosas de los pollos en comparación con la administración del antígeno de Newcastle solo. Se observó un nivel más bajo de inmunidad humoral en los pollos de engorde en comparación con las aves de postura. La vacuna con quitosano demostró una mayor actividad antigénica y protectora después de la exposición letal en comparación con la vacuna que contenía fosfato de calcio. Debido a que las partículas de quitosano cambiaron de manera eficiente inmunidad de las mucosas, la inmunidad humoral, además de la actividad protectora, el quitosano puede ser considerado en el futuro para su uso como un potencial adyuvante en la producción de vacunas en avicultura.

Evaluation of avian influenza virus (AIV) diagnostic methods, including a nucleoprotein (NP) competitive enzyme-linked immunosorbent assay (c-ELISA), hemagglutination inhibition (HI) test, type A real-time reverse transcription polymerase chain reaction (RRT-PCR), and embryonating chicken egg (ECE) virus isolation (VI), suggested validity of these tests in wild birds comparable to that reported in poultry. This was determined by analyzing the results from experimental inoculation of three species of wild birds with a low-pathogenicity AIV and from field surveillance data. The NP c-ELISA in a high–AIV prevalence setting had 100% diagnostic sensitivity (Se; 95% confidence interval [CI]: 81.5%–100%) and 91% diagnostic specificity (Sp; 95% CI: 70.8%–98.9%) in negative controls compared with the RRT-PCR. In low–AIV prevalence flocks using a >60% inhibition positivity threshold, relative to the HI test, c-ELISA performed with 90.5% Se (95% CI: 86.2%–93.8%) and 41.2% Sp (95% CI: 38.1%–44.5%). Assessment of HI suggests a titer ≥8 is a positive test result in wild-bird sera, and using this titer had 83.3% Se (95% CI: 58.6%–96.4%) in experimentally infected birds. The RRT-PCR diagnostic performance compared with VI in cloacal swabs varied over 2–6 days postinoculation, having high Se (83.3%–100%) and Sp (94.1%–100%) with substantial agreement (kappa  =  0.8). The cycle thresholds (C_t) for the RRT-PCR of C_t < 37 for positivity and C_t  =  37–40 as indeterminate were found to be valid for the species included in this study. In view of the interpretative diagnostic difficulties in heterogeneous populations of wild birds, this evaluation in three species of wild birds and in surveillance data should provide greater confidence in the application of these methods routinely used in poultry.

Evaluación de los métodos de diagnóstico serológicos y virológicos para influenza aviar en Anseriformes y Charadriiformes silvestres.

La evaluación de los métodos de diagnóstico para la influenza aviar, incluyendo un ensayo por inmunoabsorción competitivo (C -ELISA) para la nucleoproteína (NP), una prueba de inhibición de la hemaglutinación (HI), un método de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RRT- PCR) para el tipo A y el aislamiento viral en embriones de pollo, sugirió que la validez de estas pruebas en las aves silvestres es comparable a la reportada con las aves comerciales. Esto se determinó mediante el análisis de los resultados de la inoculación experimental de tres especies de aves silvestres con un virus de la influenza aviar de baja patogenicidad y de los datos de vigilancia de campo. La prueba de ELISA para la nucleoproteína mostró una sensibilidad diagnóstica del 100% en un entorno de alta prevalencia de la influenza (Se; 95% intervalo de confianza: 81.5% a 100%) y una especificidad diagnóstica del 91% (Sp; 95% intervalo de confianza: 70.8%–98.9%) en controles negativos en comparación con la RRT- PCR. En parvadas de baja prevalencia de influenza aviar, utilizando un umbral de positividad por inhibición > 60%, relativo a la prueba HI, la prueba de ELISA competitiva mostró una sensibilidad diagnóstica (Se) de 90.5% (95% IC: 86.2%–93.8%) y una especificidad diagnóstica de 41.2% Sp (95% IC: 38.1%–44.5%). La evaluación de la prueba de inhibición de la hemaglutinación sugiere que títulos ≥ 8 sean considerados como positivos en sueros de aves silvestres, y el uso de este título mostró una sensibilidad de 83.3% (95% IC: 58.6%–96.4%) en las aves infectadas experimentalmente. El rendimiento diagnóstico RRT- PCR en comparación con el aislamiento viral con hisopos cloacales mostró variación de 2–6 días después de la inoculación, mostrando una sensibilidad (83.3%–100%) y especificidad (94.1%–100%) elevadas, con una concordancia significativa (kappa  =  0.8). Los ciclos umbrales (C_t) para la prueba de R

Histomonas meleagridis, a flagellated protozoan parasite, is the causative agent of blackhead disease or histomoniasis in gallinaceous birds. Currently nitarsone (4-nitrophenylarsonic acid) is the only approved preventative drug available in the United States against blackhead disease. Initially we tested the sensitivity of three different isolates of H. meleagridis collected from outbreaks in North Carolina (strain MNC), Michigan (strain ZM), and Georgia (strain BG) to nitarsone using in vitro culture conditions. Strain ZM and strain BG at 100 and 400 ppm showed reduced growth in comparison to their respective control groups. However, there was no inhibition of growth in strain MNC treated with nitarsone at 100 ppm, while reduced growth was seen at 400 ppm. To test the resistance of strain MNC to nitarsone in vivo, turkey poults fed a nitarsone or a control diet were inoculated cloacally with H. meleagridis. The nitarsone-treated group of birds did not show any significant difference compared to that of infected control group when measuring weight gain and liver and cecal lesions scores. Histomonas meleagridis were reisolated from the nitarsone-fed turkeys and subjected to the in vitro assay. Regenerated H. meleagridis maintain their resistance to nitarsone at 100 ppm. This study demonstrates that strain MNC has acquired partial resistance to nitarsone.

Enfermedad de la cabeza negra: Sensibilidad reducida de Histomonas meleagridis a nitarsona in vitro e in vivo.

Histomonas meleagridis, un parásito protozoario flagelado, es el agente causal de la enfermedad de la cabeza negra o histomoniasis en aves gallináceas. Actualmente, la nitarsona (ácido 4-nitrofenilarsónico) es el único fármaco preventivo aprobado y disponible en los Estados Unidos contra la enfermedad de la cabeza negra. Inicialmente se probó la sensibilidad de tres diferentes aislamientos de H. meleagridis recolectados de brotes en Carolina del Norte (cepa MNC), Michigan (cepa ZM) y Georgia (cepa BG) contra la nitarsona, utilizando condiciones de cultivo in vitro. La cepa ZM y la cepa BG en dosis de 100 y de 400 ppm mostraron un crecimiento reducido en comparación con sus respectivos grupos de control. Sin embargo, no hubo inhibición del crecimiento con la cepa MNC tratada con nitarsona a 100 ppm, mientras que se observó reducción en el crecimiento con 400 ppm. Para poner a prueba la resistencia de la cepa MNC contra la nitarsona in vivo, pavipollos alimentados con nitarsona o con una dieta de control fueron inoculados por vía cloacal con H. meleagridis. El grupo de aves tratado con nitarsona no mostró ninguna diferencia significativa en comparación con la del grupo control infectado cuando se midió el aumento de peso y las puntuaciones de lesiones en el hígado y en los ciegos. Se volvió a aislar Histomonas meleagridis de los pavos alimentados con nitarsona y se sometió a los ensayos in vitro. La H. meleagridis regenerada mantiene su resistencia a la nitarsona a 100 ppm. Este estudio demuestra que la cepa MNC ha adquirido una resistencia parcial a la nitarsona.

To obtain information about Salmonella from commercial birds and poultry environments within Mississippi, 50 Salmonella enterica isolates were collected and characterized by intergenic sequence ribotyping (ISR) serotyping and by determining antimicrobial resistance. ISR assigned serotype to all 50 Salmonella enterica isolates whereas the Kauffman-White-LeMinor antibody-based scheme assigned serotype to 48. Agreement between both methods was K  =  89.58. Within the set, 12 serotypes were detected. The antimicrobial resistance patterns (ARP) of 12 serotypes, namely Enteritidis, Typhimurium, Kentucky, Bredeney, Mbandaka, Saintpaul, Montevideo, Cubana, Lille, Senftenberg, Johannesburg, and one serotype UN0094, were determined using minimum inhibitory concentration values. The antibiograms demonstrated differences between Salmonella serotypes and among isolates of the same serotype. All isolates were 100% susceptible to enrofloxacin and trimethoprim/sulfamethoxazole. The number of antimicrobials to which the isolates were resistant ranged from two to nine. Twenty-two different ARPs were identified and ARP1, with resistance to spectinomycin and sulfadimethoxine, was most frequently observed. Forty isolates (80%) were resistant to three or more antimicrobials and were thus designated multidrug resistant. Detection of a unique serotype, and variation in antibiograms within the set, demonstrates that it is important to survey isolates periodically from a region to follow epidemiologic trends.

Serotipificación y patrones de resistencia de aislados de Salmonella de aves comerciales y de medio ambiente de instalaciones avícolas en Mississippi.

Para obtener información acerca de Salmonella aislada de aves comerciales y su ambiente en Mississippi, 50 aislados de Salmonella enterica fueron colectados y caracterizados asignando sus serotipos usando la técnica de ribotipificación de secuencias intergénicas (ISR, por sus siglas en inglés) y determinando los patrones de resistencia a antimicrobianos. La ISR asignó serotipo a los 50 aislados de Salmonella enterica, mientras que mediante el esquema basado en determinación de anticuerpos por Kauffman-White-LeMinor se asignó serotipo para 48 aislados. La concordancia entre los dos métodos fue de K  =  89.58. Dentro del grupo se detectaron 12 serotipos. También fueron establecidos los patrones de resistencia contra antimicrobianos (ARP) de los 12 serotipos de S. enterica identificados (Enteritidis, Typhimurium, Kentucky, Bredeney, Mbandaka, Saintpaul, Montevideo, Cubana, Lille, Senftenberg, Johanesburg y un serotipo denominado UN0094), mediante la determinación de los valores de concentración mínima inhibitoria para los antimicrobianos evaluados. Los antibiogramas mostraron diferencias entre serotipos de Salmonella así como entre aislados del mismo serotipo. Todos los aislados fueron 100% sensibles a la enrofloxacina y al sulfatrimetropim. El número de antimicrobianos a los cuales los aislados fueron resistentes varió de 2 a 9. Se identificaron un total de 22 ARPs diferentes, determinándose al ARP1 (resistencia a 2 antimicrobianos: espectinomicina y sulfadimetoxina), como el patrón más frecuentemente observado. Cuarenta aislados (80%) fueron denominados multiresistentes por mostrar resistencia a tres o más antimicrobianos. La detección de un serotipo único y la variación en los antibiogramas dentro del grupo de aislados analizados demuestra que es importante realizar evaluaciones periódicas a los aislados de Salmonella de una región para poder hacer seguimiento a las tendencias epidemiológicas.

Samples from 231 randomly selected commercial broiler chicken flocks in Ontario were tested at slaughter for exposure to chicken anemia virus (CAV), fowl adenovirus (FAdV), and infectious bursal disease virus (IBDV). Fifteen blood samples per flock were collected and analyzed for the presence of antibodies against CAV, FAdV, and IBDV by ELISA or agar gel immunodiffusion test. Fifteen cecal tonsils and cloacal swabs per flock were analyzed for the presence of CAV, FAdV, and IBDV by PCR. The prevalence of exposure to avian adeno-associated virus (AAAV) was estimated by a PCR test on a subset of FAdV–PCR-positive samples from 178 flocks. Genotypes of FAdV and IBDV were identified on a subset of isolates (n  =  353 and 45, respectively). The flock-level period prevalence of exposure to AAAV, CAV, FAdV, and IBDV during grow-out were 88.76% (95% CI: 84.08–93.45%), 77.06% (95% CI: 71.59–82.52%), 96.54% (95% CI: 94.16–98.91%), and 48.92% (95% CI: 42.42–55.41%), respectively. Results of a multivariable logistic regression model showed a significant association of exposure to FAdV with exposure to AAAV (OR  =  18.57, 95% CI: 3.67–93.86, P  =  0.004) but not with exposure to CAV (P  =  0.7752) or exposure to IBDV (P  =  0.2274). Pathogenic FAdV genotypes (FAdV-02, FAdV-08, and FAdV-11) constituted 39.38% of the isolates. The most-common IBDV genotypes identified were IBDV NC171 (60%) and IBDV 05SA8 (28.89%). This is the first large-scale study to estimate the baseline flock prevalence of exposure to AAAV, CAV, FAdV, and IBDV in commercial broiler flocks in Canada. Potentially pathogenic genotypes of FAdV and IBDV that can guide vaccine development and disease control efforts in Ontario were identified.

Prevalencia de la exposición a virus adeno-asociados aviares, al virus de la anemia infecciosa y al virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa de Fabricio en parvadas de pollo de engorde en Ontario.

Se analizaron muestras de 231 parvadas de pollos de engorde comerciales seleccionados aleatoriamente en Ontario recolectadas durante el procesamiento, para determinar la exposición al virus de la anemia infecciosa (CAV), a adenovirus aviares (FAdV) y para el virus de la enfermedad infecciosa de la bolsa (IBDV). Se recolectaron y analizaron quince muestras por parvada para detectar la presencia de anticuerpos contra el virus de la anemia, adenovirus aviar y virus de la enfermedad de Gumboro mediante ELISA o por la prueba de inmunodifusión en gel de agar. Se analizaron quince muestras de tonsilas cecales e hisopos cloacales por parvada para detectar la presencia de los tres virus por PCR. Se estimó la prevalencia de la exposición a virus aviares adeno-asociados (AAAV) mediante una prueba de PCR en un subconjunto de muestras positivas a la presencia de adenovirus aviares por PCR de 178 parvadas. Los genotipos de adenovirus aviares y del virus de Gumboro se identificaron en un subconjunto de los aislados (n =  353 y 45, respectivamente). El nivel de prevalencia en la parvada a la exposición contra virus adeno asociados, de anemia del pollo y de Gumboro durante el periodo de engorde fueron de 88.76% (Intervalo de confianza del 95%: 84.08 al 93.45%), 77.06 % (IC del 95%: 71.59 al 82.52 %), 96.54 % (IC del 95%: 94.16 al 98.91 %) y 48.92 % (IC del 95%: 42.42 al 55.41 %), respectivamente. Los resultados de un modelo de regresión logística multivariable mostraron una asociación significativa de la exposición a adenovirus aviares con la exposición a los virus adeno asociados (OR  =  18.57, IC del 95%: 3.67 a 93.86, P  =  0.0005), pero no con la exposición a la al virus de la anemia (P  =  0.7752) o con la exposición al virus de Gumboro (P  =  0.2274). Los genotipos patógenos de adenovirus (FAdV-02, FAdV-08, y FAdV-11) constituyeron el 39.38 % de los aislamientos. Los genotipos de Gumboro más comúnmente identificados fueron NC171 (60 %)

Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) is a nonhemolytic, gram-negative, pleomorphic, rod-shaped bacterium that causes upper and lower respiratory tract disease in poultry. Recently, hemolytic strains of ORT have been isolated with increasing frequency from field outbreaks. A study was conducted to determine whether the hemolytic phenotype is associated with any change in virulence. Briefly, 225 turkey poults, vaccinated against hemorrhagic enteritis at 4 wk of age, were randomly divided into nine replicates housed in separate rooms: three sham treatment controls (25 poults/replicate), three challenged with a nonhemolytic (NH) field isolate (24 poults/replicate), and three challenged with a hemolytic (H) field isolate (24 poults/replicate). Nine days postvaccination, poults were inoculated intratracheally with either 0.2 ml sterile phosphate-buffered saline (PBS), 2 × 10⁸ colony-forming units (CFU) of the NH isolate in 0.2 ml PBS, or 2 × 10⁸ CFU of the H isolate in 0.2 ml PBS. Serum and body weights were obtained at 0, 7, 14, and 21 days postinoculation (dpi). Tissues were taken for culture and histopathology from five randomly selected poults/replicates at 7, 14, and 21 dpi. When compared with poults inoculated with the H isolate or controls, those inoculated with the NH isolate showed a highly significant depression in weight gain at 7 dpi. NH poults also had significantly higher levels of antibody against ORT at 14 and 21 dpi. Reisolations decreased over time and, by 21 dpi, only the NH phenotype could be found. Based on a Likert-type scale, poults inoculated with the NH isolate had significantly higher histopathologic lesion scores in lung tissue at 7, 14, and 21 dpi. Results suggest that nonhemolytic field isolates are more virulent then hemolytic ones. These findings are unusual because hemolytic phenotypes are often more virulent in other bacterial species.

Comparación experimental In Vivo de aislamientos de campo hemolíticos y no hemolíticos de Ornithobacterium rhinotracheale.

Ornithobacterium rhinotracheale (ORT) es una bacteria no hemolítica, pleomórfica, gram-negativa en forma de bacilo que causa enfermedad del tracto respiratorio superior e inferior en aves comerciales. Recientemente, se han aislado cepas hemolíticas de ORT asociadas con aumento de la frecuencia de los brotes en campo. Se realizó un estudio para determinar si el fenotipo hemolítico se asocia con cualquier cambio en la virulencia. Se utilizaron 225 pavipollos, vacunados contra la enteritis hemorrágica a las 4 semanas de edad, que fueron divididos aleatoriamente en nueve réplicas alojadas en unidades separadas: tres controles (25 pavitos/replica), tres unidades desafiadas con un aislamiento de campo no hemolítico (Grupo NH) (24 pavipollos/réplica), y tres unidades desafiadas con un aislamiento de campo hemolítico (Grupo H) (24 pavipollos/réplica). Nueve días después de la vacunación, los pavipollos fueron inoculados por vía intratraqueal, ya sea con 0.2 ml de solución salina estéril amortiguada con fosfato (PBS), o con 2 x 10⁸ unidades formadoras de colonias (UFC) del aislamiento no hemolítico en 0.2 ml de PBS, o con 2 × 10⁸ UFC del aislamiento hemolítico en 0.2 ml de PBS. Se obtuvieron muestras de suero y se registraron los pesos corporales a los 0, 7, 14, y 21 días después de la inoculación (dpi). Se recolectaron muestras de tejidos para cultivo y para histopatología de cinco pavos seleccionados aleatoriamente por réplica a los 7, 14 y 21 días después de la inoculación. Cuando se compararon con los pavipollos inoculados con la cepa hemolítica o con los controles, las aves inoculadas con el aislado no hemolítico mostraron una depresión en la ganancia de peso altamente significativa a los 7 días postinoculación. Los pavipollos inoculados con la cepa no hemolítica también mostraron niveles significativamente m

We developed a recombinant Newcastle disease virus (NDV) LaSota (rLS) expressing the infectious bronchitis virus (IBV) S2 gene (rLS/IBV.S2). The recombinant virus showed somewhat-reduced pathogenicity compared to the parental lentogenic LaSota strain but effectively elicited hemagglutination inhibition antibodies against NDV and protected chickens against lethal challenge with virulent NDV/CA02. IBV heterotypic protection was assessed using a prime-boost approach with a commercially available attenuated IBV Massachusetts (Mass)-type vaccine. Specific-pathogen-free chickens primed ocularly with rLS/IBV.S2 at 4 days of age and boosted with Mass at 18 days of age were completely protected against challenge at 41 days of age with a virulent Ark-type strain. In a second experiment, we compared protection conferred by priming with rLS/IBV.S2 and boosting with Mass (rLS/IBV.S2 Mass) versus priming and boosting with Mass (Mass Mass). We also modified the timing of vaccination to prime at 1 day of age and boost at 12 days of age. Challenge with virulent Ark was performed at 21 days of age. Based on clinical signs, both vaccinated groups appeared equally protected against challenge compared to unvaccinated challenged chickens. Viral loads in lachrymal fluids of birds receiving rLS/IBV.S2 Mass showed a clear tendency of improved protection compared to Mass Mass; however, the difference did not achieve statistical significance. A significant difference (P < 0.05) was determined between these groups regarding incidence of detection of challenge IBV RNA in the trachea; viral RNA was detected in 50% of rLS/IBV.S2 Mass-vaccinated chickens while chickens vaccinated with Mass Mass and unvaccinated challenged controls showed 84 and 90% incidence of IBV RNA detection in the trachea, respectively. These results demonstrate that overexposing the IBV S2 to the chicken immune system by means of a vectored vaccine, followed by boost with whole virus, protects chickens against IBV showing dissimilar S1.

El gene S2 del virus de la bronquitis infecciosa expresado en virus recombinantes confiere una amplia protección contra el desafío.

Se ha desarrollado un virus recombinante de la enfermedad de Newcastle (NDV) LaSota (rLS) que expresa el gene S2 del virus de la bronquitis infecciosa (IBV) (rLS/IBV.S2). El virus recombinante mostró patogenicidad ligeramente reducida en comparación con la cepa La Sota lentogénica que sirvió de origen, pero indujo efectivamente anticuerpos inhibidores de la hemaglutinación contra el virus de Newcastle y protegió a los pollos contra el desafío letal con la cepa virulenta NDV/CA02. Se evaluó la protección heterotípica contra el virus de bronquitis a través de un enfoque de primovacunación y de refuerzo con una vacuna Massachusetts (Mass) atenuada disponible en el mercado. Pollos libres de patógenos específicos primovacunados ocularmente con el virus rLS/IBV.S2 a los cuatro días de edad y revacunados con la cepa Massachusetts a los 18 días de edad estuvieron completamente protegidos contra la exposición a los 41 días de edad con una cepa virulenta cepa de tipo Ark. En un segundo experimento, se comparó la protección conferida por la primovacunación con rLS/IBV.S2 y la revacunación con Massachusetts (rLS/IBV.S2 Mass) en comparación con la primovacunación y refuerzo con Massachusetts (Mass Mass). También se modificó el momento de la vacunación para primovacunar al primer día de edad y con refuerzo a los 12 días de edad. El desafío con una cepa Ark virulenta se realizó a los 21 días de edad. Con base en los signos clínicos, los dos grupos vacunados aparecieron igualmente protegidos contra el desafío en comparación con pollos desafiados y no vacunados. La carga viral en los fluidos lacrimales de las aves que recibieron el virus rLS/IBV.S2 Mass mostraron una clara tendencia de mejor protección en comparación con el esquema Mass Mass, sin embargo, la diferencia

A disease with severe neurologic symptoms caused 100% mortality in a small broiler operation in the Gauteng Province, South Africa in late March 2013. Routine diagnostic PCR testing failed to identify a possible cause of the outbreak; thus, samples were submitted for virus isolation, serology, and bacteriology. An avirulent Newcastle disease virus (NDV) strain isolated was identified as a V4-like genotype 1 strain, by DNA sequencing, with a cleavage site of ¹¹²GKQGR↓L¹¹⁷. Real-time reverse transcription PCR identified NDV in the brain but not in cecal tonsils or pooled tracheas, spleens, lungs, and livers. A random amplification deep sequencing of a transcriptome library generated from pooled tissues produced 927,966 paired-end reads. A contig of 2,309 nucleotides was identified as a near-complete avian gyrovirus 2 (AGV2) genome. This is the first report on the African continent of AGV2, which has been reported in southern Brazil, the Netherlands, and Hong Kong thus far. A real-time PCR for AGV2 only detected the virus in the brain but not in cecal tonsils or pooled tracheas, spleens, lungs, and livers. Sequence reads also mapped to the genomes of mycoplasma, Escherichia coli, avian leukosis virus subtype J, and Marek's disease virus but excluded influenza A virus, Ornithobacterium rhinotracheale, avian rhinotracheitis virus, avian encephalomyelitis virus, and West Nile virus. Air sac swabs were positive on bacterial culture for E. coli. The possibility of a synergistic pathogenic effect between avirulent NDV and AGV2 requires further investigation.

Coinfección entre el gyrovirus aviar 2 y el virus de la enfermedad de Newcastle avirulento en una parvada de pollo de engorde con signos neurológicos y alta mortalidad.

Una enfermedad con signos neurológicos graves causó una mortalidad del 100 % en una operación pequeña de pollos de engorde en la provincia de Gauteng, en Sudáfrica a finales de marzo del 2013. Las pruebas rutinarias de diagnóstico por PCR no lograron identificar una posible causa del brote, por lo que las muestras fueron sometidas al aislamiento viral, serología y bacteriología. Se aisló e identificó un virus de la enfermedad de Newcastle no virulento (NDV) como una cepa similar al genotipo 1 V4, por secuenciación de ADN, en el sitio de disociación ¹¹²GKQGR ↓ L¹¹⁷. Mediante un método de transcripción reversa y PCR en tiempo real se identificó la presencia del virus de Newcastle en el cerebro, pero no en las tonsilas cecales o en las muestras agrupadas de tráquea, bazo, pulmones, e hígado. Una amplificación con secuenciación profunda y aleatoria de una biblioteca de transcriptoma generada a partir de muestras agrupadas de tejidos produjo 927,966 lecturas emparejadas. Se identificó un contig de 2309 nucleótidos como un genoma casi completo de un Gyrovirus aviar 2 (AGV2). Este es el primer informe en el continente africano de la presencia del AGV2, que se ha reportado hasta el momento en el sur de Brasil, los Países Bajos y Hong Kong. Un método de PCR en tiempo real para AGV2 sólo detectó al virus en el cerebro, pero no se detectó en las tonsilas cecales, o en las muestras agrupadas de tráquea, bazos, pulmones e hígado. Las lecturas de las secuencias también se relacionaron con el genoma de mycoplasma, Escherichia coli, con el virus de la leucosis aviar subtipo J, y con el virus de la enfermedad de Marek, pero excluyó al virus de la influenza A, Ornithobacterium rhinotracheale, al virus de la rinotraqueítis aviar, al virus de la encefalomielitis aviar y al virus del Nilo Occidental. Los hisopos de sacos aéreos fueron positivos para el cultivo bacteriano de E. coli. La posibilidad de un efecto patogénico sinérgico entre el virus de Newcastle avirulento y el AGV2 requiere de más investigación.

There is a paucity of preclinical models that simulate the development of ovarian tumors in humans. At present, the egg-laying hen appears to be the most promising model to study the spontaneous occurrence of ovarian tumors in the clinical setting. Although gross classification and histologic grade of tumors have been used prognostically in women with ovarian tumors, there is currently no single system that is universally used to classify reproductive tumors in the hen. Four hundred and one 192-wk-old egg-laying hens were necropsied to determine the incidence of reproductive tumors using both gross pathology and histologic classification. Gross pathologic classifications were designated as follows: birds presenting with ovarian tumors only (class 1), those presenting with oviductal and ovarian tumors (class 2), those with ovarian and oviductal tumors that metastasized to the gastrointestinal tract (class 3), those with ovarian and oviductal tumors that metastasized to the gastrointestinal tract and other distant organs (class 4), those with oviductal tumors only (class 5), those with oviductal tumors that metastasized to other organs with no ovarian involvement (class 6), and those with ovarian tumors that metastasized to other organs with no oviductal involvement (class 7), including birds with gastrointestinal tumors and no reproductive involvement (GI only) and those with no tumors (normal). Histopathologic classifications range from grades 1 to 3 and are based on mitotic developments and cellular differentiation. An updated gross pathology and histologic classification systems for the hen reproductive malignancies provides a method to report the range of reproductive tumors revealed in a flock of aged laying hens.

Tumores de células epiteliales del tracto reproductivo de la gallina.

Hay una escasez de modelos preclínicos que simulen el desarrollo de los tumores de ovario en humanos. En la actualidad, la gallina de postura parece ser el modelo más prometedor para estudiar la aparición espontánea de tumores en el ovario en el ámbito clínico. Aunque la clasificación macroscópica y el grado histológico de los tumores se han utilizado para realizar el pronóstico en mujeres con tumores de ovario, no existe actualmente ningún sistema que se utilice universalmente para clasificar tumores reproductivos en la gallina. Se realizó la necropsia de 401 gallinas de postura de 192 semanas de edad para determinar la incidencia de los tumores del aparato reproductor utilizando tanto patología macroscópica y clasificación histológica. Las clasificaciones patológicas macroscópicas fueron designadas de la siguiente manera: las aves que presentaron únicamente tumores de ovario (clase 1), los que presentan tumores de ovario y oviducto (clase 2), aquellos con tumores de ovario y oviducto y con metástasis en el tracto gastrointestinal (clase 3), las aves que tienen tumores de ovario y oviducto, con metástasis en el tracto gastrointestinal y otros órganos distantes (clase 4), las aves que tienen tumores del oviducto solamente (clase 5), aquellas con tumores del oviducto con metástasis a otros órganos sin la participación de ovario (clase 6), y las aves que tienen tumores de ovario con metástasis a otros órganos sin la participación del oviducto (clase 7), incluidas las aves con tumores gastrointestinales y sin compromiso del aparato reproductivo (sólo tracto gastrointestinal) y las aves que no tienen tumores (normales). Las clasificaciones histopatológicas tuvieron un rango que va desde los grados 1 a 3, y se basaron en el desarrollo de mitosis y diferenciación celular. Una descripción patológica macroscópica actualizada y los sistemas de clasificación histológica de los tumores malignos reproductivos de la gallina proporcionan un método para reportar la gama de tumores reproductivos detectados en una parvada de gallinas ponedoras de edad.

Factors responsible for the persistence of Arkansas Delmarva Poultry Industry (ArkDPI)-derived infectious bronchitis vaccines in commercial flocks and the high frequency of isolation of ArkDPI-type infectious bronchitis viruses in respiratory cases are still unclear. We compared dynamics of vaccine viral subpopulations, viral loads, persistence in trachea and cloaca, and the magnitude of infectious bronchitis virus (IBV)-specific antibody induction after vaccination with two commercial ArkDPI-derived Arkansas (Ark) serotype vaccines. One of the vaccines (coded vaccine B) produced significantly higher vaccine virus heterogeneity in vaccinated chickens than the other vaccine (coded A). Chickens vaccinated with vaccine B had significantly higher viral loads in tears at 5 days postvaccination (DPV) than those vaccinated with vaccine A. Vaccine B also induced a significantly higher lachrymal immunoglobulin M response at 11 DPV, an earlier peak of IBV-specific lachrymal immunoglobulin A, and higher serum antibodies than vaccine A. In addition, a significantly higher proportion of birds vaccinated with vaccine B had vaccine virus detected in the trachea at 20 DPV than those vaccinated with vaccine A. Furthermore, the virus detected at 20 DPV in most of the chickens vaccinated with vaccine B was a single specific subpopulation (subpopulation 4) selected from multiple vaccine subpopulations detected earlier at 5 and 7 DPV in the same chickens. On the other hand, a higher proportion of chickens vaccinated with vaccine A had virus detected in cloacal swabs at 20 DPV. Thus we found differences in mucosal antibody induction and selection and persistence of vaccine viruses between two ArkDPI-derived vaccines from different manufacturers. The higher vaccine virus heterogeneity observed in chickens vaccinated with vaccine B compared with those vaccinated with vaccine A may be responsible for these differences. Thus the high frequency of Ark IBV viruses in the field may be due to the inherent ability of some ArkDPI-derived vaccine viruses to be selected and persist in vaccinated chickens. Vaccine virus persistence may offer genetic material for recombination or may undergo mutations with the potential to result in increased virulence.

Comparación de la selección de subpoblaciones vacunales, carga viral, persistencia el virus vacunal en la tráquea y cloaca y respuestas de anticuerpos en las mucosas después de la vacunación con dos vacunas diferentes derivadas del serotipo Arkansas-Industria Avícola de Delmarva.

Los factores responsables para la persistencia de las vacunas contra la bronquitis infecciosa que son derivadas del serotipo Arkansas Delmarva Poultry Industry (ArkDPI) en las aves comerciales y la alta frecuencia de aislamiento del serotipo ArkDPI en casos respiratorios aún no se ha clarificado. Se comparó la dinámica de las subpoblaciones virales vacunales, las cargas virales, la persistencia en la tráquea y la cloaca, y la magnitud de la inducción de anticuerpos específicos contra el virus de la bronquitis infecciosa (IBV) después de la vacunación con dos vacunas comerciales derivadas del serotipo Arkansas ArkDPI Arkansas (ARK). Una de las vacunas (codificada como vacuna B) produjo significativamente una mayor heterogeneidad viral en los pollos vacunados en comparación con la otra vacuna (codificada como vacuna A). Los pollos vacunados con la vacuna B mostraron cargas virales significativamente más altas en las lágrimas a los 5 días después de la vacunación (DPV) que los pollos vacunados con la vacuna A. La vacuna B también indujo una respuesta significativamente mayor de inmunoglobulina M en las lágrimas a los 11 días después de la vacunación, y mostró un pico más temprano de inmunoglobulinas específicas contra el virus de bronquitis infecciosa en las lágrimas, además de anticuerpos séricos más altos que la vacuna A. También, una proporción significativamente mayor de las

Disease surveillance is vital to the management of New Zealand's endemic and threatened avian species. Three infectious agents that are potential threats to New Zealand's endemic birds include avian polyomavirus (APV), beak and feather disease virus (BFDV), and avian malaria. All three agents have been reported in New Zealand; however, possible reservoir populations have not been identified. In this communication, we report the first study of APV, BFDV, and avian malaria in introduced adult exhibition budgerigars (Melopsittacus undulatus) in New Zealand. Blood samples were collected from 90 living adult budgerigars from three breeding locations in the North Island of New Zealand. An overall APV prevalence of 22% was determined using a broad-spectrum nested PCR that amplified the major capsid protein VP1 gene of polyomavirus. Phylogenetic analysis of the VP1 gene revealed a unique isolate of APV, which had a sequence divergence of 32% to previously reported budgerigar fledgling disease strains and 33% to the recently reported New Zealand finch isolate. All of the budgerigars sampled were found to be PCR negative for BFDV, and an overall prevalence of 30% was detected by PCR for avian malaria. Sequencing revealed the presence of ubiquitous malarial strains and also the potentially destructive Plasmodium relictum strain. The results of this study suggest that both APV and avian malaria are present in New Zealand adult budgerigars, and our study highlights the need for further studies to determine whether these pathogens in captive bird populations may be a threat or spill over into New Zealand's endemic and threatened avifauna and whether prevention and control methods need to be implemented.

Un estudio de enfermedades de tres poblaciones reproductoras de periquitos australianos (Melopsittacus undulatus) de exhibición en Nueva Zelanda revela una alta prevalencia de una infección por un nuevo poliomavirus y por la malaria aviar.

La vigilancia de enfermedades es vital para el manejo de las especies aviares endémicas y amenazadas de Nueva Zelanda. Tres agentes infecciosos que son amenazas potenciales para las aves endémicas de Nueva Zelanda incluyen al poliomavirus aviar (APV), el virus de la enfermedad del pico y plumas (BFDV), y la malaria aviar. Los tres agentes se han reportado en Nueva Zelanda, sin embargo, no han sido identificadas poblaciones de posibles reservorios. En este artículo se presenta el primer estudio de poliomavirus aviar, del virus del pico y las plumas y de la malaria aviar en periquitos australianos (Melopsittacus undulatus) adultos de exhibición introducidos a Nueva Zelanda. Se recolectaron muestras de sangre de 90 periquitos adultos vivos de tres lugares de cría en la Isla Norte de Nueva Zelanda. Se determinó una prevalencia general de poliomavirus aviar de 22% utilizando un método de PCR anidado que amplifica el gene de la proteína principal de la cápside VP1 del poliomavirus. El análisis filogenético del gene VP1 reveló un aislamiento único de poliomavirus, que tenía una divergencia de 32% en su secuencia en comparación con las cepas previamente asociadas con la enfermedad de la muda francesa de los periquitos (budgerigar fledgling disease) y de un 33% con un aislamiento de pinzón de Nueva Zelanda reportado recientemente. Todos los periquitos muestreados resultaron ser negativos por PCR para la enfermedad del pico y las plumas, y se detectó una prevalencia general del 30% por PCR para la malaria aviar. La secuenciación reveló la presencia de cepas de malaria ubicuas y de una cepa de Plasmodium relictum que es potencialmente destructiva. Los resultados de este estudio sugieren que tanto poliomavirus aviar y la malaria aviar están presentes en periquitos australianos adultos de Nueva Zelanda y ponen de manifiesto la necesidad de realizar más estudios para determinar si estos patógenos presentes en poblaciones de

Newcastle disease (ND) is highly contagious and causes severe economic losses to the poultry industry due to high morbidity and mortality. In this report, we describe the detection of Newcastle disease virus (NDV) in formalin-fixed tissues from an outbreak of ND on broiler farms in Egypt. The affected birds experienced respiratory and/or nervous signs and a 75% mortality rate. Tissue samples were collected and placed in 10% neutral buffered formalin followed by embedding in paraffin. RNA was extracted from 80-µm formalin-fixed paraffin-embedded tissue blocks and recovered in 60 µl of elution buffer. All samples were negative for influenza virus by real-time reverse-transcription (RT)-PCR but positive for NDV. These flocks were known to have been vaccinated with a live NDV vaccine (LaSota strain). The nucleic acid sequences of the virus detected in this study were similar to those of a velogenic virus at its cleavage site ¹¹¹GRRQKR*F¹¹⁷ and clustered with class II genogroup VII lineage of NDV, with a nucleotide sequence identity of 94%–99%. Although extraction and amplification of NDV from paraffin-embedded tissues from experimentally infected birds has been reported previously, this study reports on the use of RT-PCR on formalin-fixed tissues from actual field samples.

Detección y caracterización del virus de la enfermedad de Newcastle en tejidos fijados en formalina e incluidos en parafina y provenientes de pollos de engorde de Egipto.

La enfermedad de Newcastle (ND) es altamente contagiosa y causa graves pérdidas económicas a la industria avícola debido a la alta morbilidad y mortalidad. En este reporte se describe la detección del virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) en tejidos fijados en formalina recolectados durante un brote de la enfermedad de Newcastle en las granjas de engorde en Egipto. Las aves afectadas experimentaron signos respiratorios y/o nerviosos y una tasa de mortalidad del 75%. Se recolectaron muestras de tejidos y se colocaron en formalina neutra amortiguada al 10% y finalmente las muestras se incluyeron en parafina. Se extrajo el ARN a partir de bloques de tejido fijado con formalina e incluido en parafina de 80 micras y se recuperó en 60 µl del buffer de elución. Todas las muestras fueron negativas para el virus de la influenza aviar mediante un método de transcripción reversa y PCR en tiempo real, pero resultaron positivas para la presencia del virus de Newcastle. Se conocía que estas parvadas habían sido vacunadas con una vacuna viva de Newcastle (cepa LaSota). Las secuencias de los ácidos nucleicos del virus detectado en este estudio fueron similares a las secuencias de un virus velogénico en el sitio de disociación ¹¹¹GRRQKR*F¹¹⁷ y se agruparon en el genogrupo clase II, linaje VII del virus de Newcastle, con una identidad en la secuencia de nucleótidos del 94% al 99%. Aunque la extracción y la amplificación del virus de Newcastle a partir de tejidos en parafina procedentes de aves infectadas experimentalmente se ha reportado anteriormente, este estudio informa sobre el uso de un método de RT-PCR en tiempo real con tejidos fijados en formalina provenientes de muestras reales de campo.

Fowl cholera, caused by Pasteurella multocida, remains a major problem of poultry worldwide. In the current report, we describe an outbreak in free range organic broilers. In addition to culturing samples from dead broilers, we attempted to isolate P. multocida from feral cats trapped on the farm. The isolates were identified by PCR as P. multocida and then serotyped using the Heddleston scheme and genotyped using both a multilocus sequence typing (MLST) method and an enterobacterial repetitive intergenic consensus (ERIC)-PCR method. A total of 123 isolates of P. multocida were recovered from 12 broilers. All 123 isolates were examined by ERIC-PCR, and only one pattern was identified. A subset of seven broiler isolates were examined by MLST and all were typed as sequence type (ST) 20. A total of 28 isolates of P. multocida were recovered from 17 cats, and five ERIC-PCR genotypes were identified, with one genotype (E-1, shared by 19 isolates) being the same as the ERIC-PCR pattern associated with the broilers. One representative cat strain for each ERIC-PCR pattern was subjected to MLST. The cat isolate with the same ERIC-PCR genotype as the broiler isolates was confirmed as having the same MLST result, ST 20. The other five cat ERIC-PCR patterns were allocated to four STs: E-2 and E-5 to ST 265, E-3 to ST 30, E-4 to ST 20, and E-6 to ST 264. Both genotyping methods confirmed that isolates of P. multocida were common between the feral cats and the chickens. It was not clear whether the strain was transmitted from the cats to the chicken or whether the cats obtained the strain preying on chicken. The study has shown that cats can harbor P. multocida strains with the same genotype found in chickens affected with fowl cholera.

Epidemiología del cólera aviar en pollos orgánicos—Estudio de un caso.

El cólera aviar, causada por Pasteurella multocida, sigue siendo un problema importante en la avicultura a nivel mundial. En el presente reporte, se describe un brote en pollos de engorde de tipo orgánico. Además de cultivar muestras de pollos muertos, se intentó aislar P. multocida de gatos salvajes atrapados en la granja. Los aislamientos fueron identificados por PCR como P. multocida y luego fueron serotipificados utilizando el esquema de Heddleston y genotipificados utilizando tanto el método de tipificación por secuencia multilocus (MLST) y mediante el método del consenso intergénico repetitivo de enterobacerias (ERIC)-PCR. Se recuperaron un total de 123 aislamientos de P. multocida de 12 pollos de engorde. Todos los 123 aislamientos fueron examinados por ERIC-PCR, y se identificó un solo patrón. Un subconjunto de siete aislamientos de pollos de engorde fueron examinados por el método MLST y todos se tipificaron como secuencia tipo (ST) 20. Un total de 28 aislamientos de P. multocida se recuperaron a partir de 17 gatos, y se identificaron cinco genotipos por ERIC-PCR, con un genotipo (E-1, compartida por 19 aislamientos) siendo el mismo que el patrón de ERIC-PCR asociado con los pollos de engorde. Una cepa representativa de gato de cada patrón de ERIC-PCR fue sometida a MLST. El aislamiento de gato con el mismo genotipo ERIC-PCR del aislado de pollo de engorde se confirmó que mostraba el mismo resultado por MLST, ST 20. Los otros cinco patrones de ERIC-PCR de aislamientos de gatos fueron asignados a cuatro serotipos: E-2 y E-5 a ST 265, E-3 a ST 30, E-4 a ST 20, y E-6 a ST 264. Ambos métodos de genotipificación confirmaron que los aislamientos de P. multocida eran comunes entre los gatos silvestres y los pollos. No estuvo claro si las cepas se transmitían de los gatos al pollo, o si los gatos la obtenían mediante la predación de los pollos. El estudio ha demostrado que los gatos pueden albergar cepas de P. multocida con el mismo genotipo encontrado en los pollos afectados con

Since their introduction to the United States in the late 19th century, mute swans (Cygnus olor) have become a nuisance species by causing damage to aquatic habitats, acting aggressively toward humans, competing with native waterfowl, and potentially transmitting or serving as a reservoir of infectious diseases to humans and poultry. In an effort to investigate their potential role as a disease reservoir and to establish avian health baselines for pathogens that threaten agricultural species or human health, we collected samples from 858 mute swans and tested them for avian paramyxovirus serotype 1 (APMV-1), avian influenza virus (AIV), and Salmonella spp. when possible. Our results indicate that exposure to APMV-1 and AIV is common (60%, n  =  771, and 45%, n  =  344, antibody prevalence, respectively) in mute swans, but detection of active viral shedding is less common (8.7%, n  =  414, and 0.8%, n  =  390, respectively). Salmonella was isolated from three mute swans (0.6%, n  =  459), and although the serovars identified have been implicated in previous human outbreaks, it does not appear that Salmonella is commonly carried by mute swans.

Paramixovirus aviar serotipo 1 (virus de la enfermedad de Newcastle), virus de influenza aviar y Salmonella spp. en cisnes comunes (Cygnus olor) de la Región de los Grandes Lagos y en la costa atlántica de los Estados Unidos.

Desde su introducción a los Estados Unidos a finales del siglo 19, los cisnes comunes (Cygnus olor) se han convertido en una especie problemática, porque causa daños a los hábitats acuáticos, actuando agresivamente hacia los seres humanos, compite con las aves acuáticas nativas, y potencialmente puede transmitir o servir como reservorio de enfermedades infecciosas para los seres humanos y para las aves comerciales. En un esfuerzo por investigar su posible papel como reservorios de la enfermedad y para establecer líneas base de salud aviar para los patógenos que amenazan a las especies agrícolas o a la salud humana, se recolectaron muestras de 858 cisnes comunes y se analizaron para detectar paramixovirus aviar serotipo 1 (APMV- 1), virus de la influenza aviar (AIV) y Salmonella spp. cuando fue posible. Los resultados indican que la exposición a APMV -1 y al virus de influenza aviar es común en cisnes comunes (60%, n  =  771, y 45%, n  =  344, para la prevalencia de anticuerpos, respectivamente), pero la detección de la replicación viral activa es menos común (8.7%, n  =  414, y 0.8%, n  =  390, respectivamente). Se aisló Salmonella de tres cisnes comunes (0.6%, n  =  459), y aunque los serovares identificados han sido implicados en brotes humanos anteriores, no parece que la Salmonella sea acarreada comúnmente por los cisnes comunes.

A previous metagenomic analysis of the turkey gut RNA virus community identified novel enteric viruses that may play roles in poultry enteric diseases or in performance problems noted in the field. As part of the molecular characterization of these novel enteric viruses, a reverse transcriptase–PCR diagnostic assay was developed, targeting a novel turkey-origin picobirnavirus (PBV) initially identified in a pooled intestinal sample from turkey poults in North Carolina. Little detailed molecular information exists regarding the family Picobirnaviridae, particularly for the PBVs that have been described in avian species. This diagnostic assay targets the turkey PBV RNA-dependent RNA polymerase gene and produces an 1135-bp amplicon. This assay was validated using in vitro transcribed RNA and was tested using archived enteric samples collected from turkey flocks in the southeastern United States. Further, a phylogenetic analysis suggests the turkey PBV is unique because it does not group closely with the recognized PBV genogroups circulating in mammalian hosts.

Nota de Investigación—Análisis molecular y filogenético de un nuevo Picobirnavirus originado en pavos.

Mediante un previo análisis metagenómico de una comunidad de virus ARN intestinales de los pavos, se identificaron nuevos virus entéricos que pueden ser importantes en las enfermedades entéricas de las aves comerciales o en los problemas en la productividad observados en el campo. Como parte de la caracterización molecular de estos nuevos virus entéricos, se desarrolló un ensayo diagnóstico de transcripción reversa y PCR, dirigido a un picobirnavirus nuevo de origen en los pavos (PBV), que fue inicialmente identificado en un grupo de muestras intestinales combinadas de pavos de Carolina del Norte. Existe poca información molecular detallada sobre la familia Picobirnaviridae, en particular para los picobirnavirus que han sido descritos en las especies aviares. Este ensayo de diagnóstico está dirigido al gene de la polimerasa de ARN dependiente de ARN del picobirnavirus de los pavos y produce un amplicón de 1135 pares de bases. Este ensayo fue validado utilizando ARN transcrito in vitro y se puso a prueba utilizando muestras entéricas archivadas que fueron recolectadas de parvadas de pavos en el sureste de los Estados Unidos. Los análisis filogenéticos posteriores sugieren que el picobirnavirus de los pavos es único, ya que no se agrupa estrechamente con los genogrupos de picobirnavirus reconocidos que circulan en huéspedes mamíferos.

The bacterium Avibacterium paragallinarum is the etiologic agent of infectious coryza of chickens. Serovar C-1 has emerged in infectious coryza outbreaks in layer hens of Ecuador and Mexico. In the current study, genotyping and phylogenetic analyses of five Ecuadorian and 10 Mexican isolates of Av. paragallinarum serovar C-1 were performed. All 15 isolates share a unique enterobacterial repetitive intergenic consensus-based-PCR fingerprint and have identical 16S ribosomal RNA and hemagglutinin antigen gene sequences. Results indicate that Ecuadorian and Mexican isolates of serovar C-1 of Av. paragallinarum have a clonal relationship.

Nota de Investigación—Relación filogenética de aislamientos de Avibacterium paragallinarum serovar C-1.

La bacteria Avibacterium paragallinarum es el agente etiológico de la coriza infecciosa de los pollos. El serovar C-1 se ha presentado en brotes de coriza infecciosa en gallinas ponedoras de Ecuador y de México. En el presente estudio, se llevó a cabo la genotipificación y análisis filogenéticos de cinco aislamientos ecuatorianos y de diez aislamientos mexicanos de Av. paragallinarum serovar C-1. Los 15 aislamientos compartieron una huella genética intergénica, consensuada y repetitiva única de enterobacterias, que fue detectada por PCR y también mostraron secuencias idénticas de los genes ribosomal 16S y del antígeno de la hemaglutinina. Los resultados indican que los aislamientos ecuatorianos y mexicanos de serovar C-1 de Av. paragallinarum tienen una relación clonal.

Recent phylogenetic studies have identified different genotypic lineages of infectious laryngotracheitis virus (ILTV), and these lineages can recombine in the field. The emergence of virulent recombinant field strains of ILTV by natural recombination between commercial vaccines belonging to different genotypic lineages has been reported recently. Despite the use of attenuated ILTV vaccines, these recombinant viruses were able to spread and cause disease in commercial poultry flocks, raising the question of whether the different lineages of ILTV can induce cross-protective immune responses. This study examined the capacity of the Australian-origin A20 ILTV vaccine to protect against challenge with the class 8 ILTV recombinant virus, the genome of which is predominantly derived from a heterologous genotypic lineage. Following challenge, birds vaccinated via eyedrop were protected from clinical signs of disease and pathological changes in the tracheal mucosa, although they were not completely protected from viral infection or replication. In contrast, the challenge virus induced severe clinical signs and tracheal pathology in unvaccinated birds. This is the first study to examine the ability of a vaccine from the Australian lineage to protect against challenge with a virus from a heterologous lineage. These results suggest that the two distinct genotypic lineages of ILTV can both induce cross-protection, indicating that current commercial vaccines are still likely to assist in control of ILTV in the poultry industry, in spite of the emergence of novel recombinants derived from different genotypic lineages.

Nota de Investigación—Respuesta inmune de protección cruzada entre los linajes genotípicamente distintos del virus de la laringotraqueitis infecciosa.

Estudios filogenéticos recientes han identificado diferentes linajes genotípicos del virus de la laringotraqueitis infecciosa (con las siglas en inglés ILTV) y estos linajes pueden recombinarse en el campo. Recientemente, se ha reportado la aparición de cepas de campo recombinadas virulentas del virus de laringotraqueítis infecciosa por recombinación natural entre las vacunas comerciales pertenecientes a diferentes linajes genotípicos. A pesar del uso de vacunas atenuadas del virus de laringotraqueítis, estos virus recombinantes han sido capaces de propagarse y causar enfermedad en parvadas avícolas, planteando la cuestión de si los diferentes linajes de virus de laringotraqueítis infecciosa pueden inducir respuestas inmunes con protección cruzada. Este estudio examinó la capacidad de la vacuna de virus de laringotraqueítis infecciosa A20 - origen australiano para proteger contra el desafío con el virus recombinante de clase 8 ILTV, cuyo genoma se deriva principalmente de un linaje genotípico heterólogo. Después del desafío, las aves vacunadas por vía ocular estuvieron protegidas contra la presentación de signos clínicos y cambios patológicos en la mucosa traqueal, aunque no estuvieron completamente protegidos contra la infección replicación viral. En contraste, el virus de desafío indujo signos clínicos severos y lesiones traqueales en las aves no vacunadas. Este es el primer estudio para examinar la capacidad de una vacuna de estirpe australiana para proteger contra el desafío con un virus de un linaje heterólogo. Estos resultados sugieren que los dos linajes distintos del virus de laringotraqueítis genotípicos pueden inducir protección cruzada, lo que indica que las vacunas comerciales actuales todavía ayudan en el control del virus de laringotraqueítis infecciosa en la industria avícola, a pesar de la aparición de nuevos recombinantes derivados de diferentes linajes genotípicos.

Rotaviruses are a major cause of diarrhea in humans and animals, including several mammalian and avian species. Using different PCR protocols, we report the occurrence of rotavirus A in 21 (53.84%; 21/39) from 39 fecal pool samples of broilers, layers, and broiler breeders from Brazilian avian farms. We typed the G5, G8, G11, G19, and P[31] genotypes.

Nota de Investigación—Presentación y caracterización de rotavirus A en pollos de engorde, gallinas de postura y en reproductores pesados.

Los rotavirus son una causa importante de diarrea en los seres humanos y animales, incluyendo varias especies de mamíferos y aves. Mediante el uso de diferentes protocolos de PCR, se reporta la presentación de rotavirus A en 21 (53.84%, 21/39) de 39 muestras fecales agrupadas de pollos de engorde, ponedoras, reproductoras pesados de granjas avícolas brasileñas. Se detectaron los genotipos G5, G8, G11, G19 y P [31].

Avian astrovirus infections are widespread in many countries, and infections have been connected with enteritis and increased mortality in young birds. In the present study, fecal samples were collected during 2009–2012 from a total of 156 meat turkey flocks. Astrovirus presence and type differentiation was performed with the use of two molecular diagnostic approaches. Out of 156 flocks, 48.7% were found to be TAstV positive. Depending on the method used for type differentiation, TAstV-2 and TAstV-1 prevalence was between 31.4%–41% and 9.6%–15.4%, respectively. No avian nephritis virus was detected. About 30% of astrovirus-positive flocks were infected with both types of TAstV. Phylogenetic analysis based on the partial polymerase gene sequence revealed the genetic variability of isolated TAstV, and most of the detected TAstV-2 belonged to the European lineage of astroviruses. Statistical analysis suggested the positive but weak correlation between the presence of astrovirus and health status (slightly more frequent detection of TAstV in sick, diarrheic birds) and also negative medium correlation between age and astrovirus occurrence.

Nota de Investigación—Astrovirus en granjas de pavos comerciales en Polonia en los años 2009–2012.

Las infecciones por astrovirus aviar son comunes en muchos países y estas infecciones se han relacionado con enteritis y aumento de la mortalidad en aves jóvenes. En el presente estudio, se recolectaron muestras de heces durante los años 2009 al 2012, de un total de 156 parvadas de pavos de carne. La presencia de astrovirus y su tipificación se realizó con el uso de dos métodos de diagnóstico molecular. De las 156 parvadas, el 48.7% resultaron ser positivas al astrovirus de los pavos. Dependiendo del método utilizado para la tipificación, la prevalencia de astrovirus de los pavos tipo 2 y tipo 1 fue de entre 31.4% a 41% y de 9.6% a 15.4%, respectivamente. No se detectó al virus de la nefritis aviar. Alrededor del 30% de las parvadas positivas para la presencia de astrovirus estaban infectadas con ambos tipos. El análisis filogenético basado en la secuencia parcial del gene de la polimerasa reveló la variabilidad genética de los aislamientos de astrovirus de los pavos y la mayoría de los aislamientos del serotipo 2 pertenecían al linaje europeo de astrovirus. El análisis estadístico sugirió una correlación positiva pero débil entre la presencia de astrovirus y el estado de salud (con detección de astrovirus de los pavos ligeramente más frecuente en aves enfermas y diarreicas) y también se observó una correlación negativa intermedia entre la edad y la presencia de astrovirus.

A severe outbreak of salmonellosis in commercial brown table egg layers first occurred in Colombia in 2006. From 2008 to 2012, 35 samples collected from commercial layers farms in the states of Cundinamarca, Santander, Bolivar, and San Andres, were positive for Salmonella enterica. Salmonella was isolated from liver and spleen (71.42%), pools of organs (liver, spleen, and ovarian follicles; 25.71%), and drag swabs (2.85%). Serotype was assigned using single nucleotide polymorphisms or DNA microarray hybridization. Sixteen strains of Salmonella Enteritidis, and 13 of Salmonella Gallinarum were identified. Seven strains yielded three unique sequences, and they were designated as UN0038, UN0052, and UN0054 by intergenic sequence ribotyping. These strains were later identified as Salmonella serotypes Isangi, Braenderup, and Yoruba, respectively, by DNA microarray hybridization. The discovery that a common human pathogen (Salmonella Enteritidis) was coisolated from farms with an avian pathogen (Salmonella Gallinarum) in similar commercial brown layer hens and in different regions indicates that it is important to investigate the dynamics of Salmonella infection and determine the serotypes circulating within the same ecologic niche.

Reporte de Caso—Presencia de Salmonella Enteritidis y Salmonella Gallinarum en gallinas de postura comerciales con diagnóstico de tifoidea aviar en Colombia.

En Colombia en el año 2006 se presentó por primera vez un brote severo de salmonelosis en ponedoras comerciales de huevo marrón. Entre los años 2008 y 2012, 35 muestras recolectadas de granjas de postura comerciales de los departamentos de Cundinamarca, Santander, Bolívar y San Andrés, resultaron positivas para Salmonella enterica. Se aisló Salmonella de hígado y bazo (71.42%), de muestras combinadas de órganos (hígado, bazo y folículos ováricos, 25.71%), y de hisopos de arrastre (2.85%). El serotipo fue asignado mediante polimorfismos de nucleótidos simples o por microarreglos de hibridación de ADN. En 16 aislados se identificó Salmonella Enteritidis, y en 13 Salmonella Gallinarum. Siete aislados produjeron tres secuencias únicas, que se designaron como UN0038, UN0052 y UN0054 mediante ribotipificación de secuencias intergénicas. Posteriormente, estas cepas fueron identificadas como Salmonella serotipos Isangi, Braenderup y Yoruba, respectivamente; mediante microarreglos de hibridación de ADN. El descubrimiento de que un patógeno humano común (Salmonella Enteritidis) fue co-aislado con un patógeno aviar (Salmonella Gallinarum) en granjas de gallinas de postura comerciales de huevo marrón y en diferentes regiones, indica que es importante investigar la dinámica de la infección por Salmonella y también determinar los serotipos circulantes dentro del mismo nicho ecológico.

Four cases of fatal toxoplasmosis in three endemic New Zealand avian species are reported. Between 2009 and 2012, two kereru (Hemiphaga novaeseelandiae), one North Island brown kiwi (Apteryx mantelli), and one North Island kaka (Nestor meridionalis) were submitted for necropsy examination. On gross postmortem, the kiwi had marked hepatosplenomegaly while the kaka and two kereru had swollen, slightly firm, deep-red lungs. Histologically there was extensive hepatocellular necrosis in the liver of the kiwi while the kaka and kereru showed severe fibrinous bronchointerstitial pneumonia. In the kiwi, protozoal organisms were present within both hepatocytes and Kupffer cells of the liver and within the epithelial cells and macrophages of the interstitium of the lungs in the kaka and two kereru. The diagnosis of toxoplasmosis was confirmed with immunohistochemistry and PCR of paraffin-embedded formalin-fixed tissue of the liver, lungs, or both. Genotyping of up to seven markers revealed that an atypical Type II isolate of Toxoplasma gondii was present in at least three of the cases. This study provides evidence that T. gondii can cause mortality in these endemic species and suggests further research is needed to determine the full extent of morbidity and mortality caused by this parasite in New Zealand's unique avifauna.

Reporte de Caso—Cuatro casos de toxoplasmosis fatal en tres especies de aves endémicas de Nueva Zelanda.

Se reportaron cuatro casos de toxoplasmosis fatal en tres especies aviares endémicas de Nueva Zelanda. Entre los años 2009 y 2012, dos palomas neozelandesa (Hemiphaga novaeseelandiae), un kiwi marrón (Apteryx mantelli), y un kaka (Nestor meridionalis) se sometieron al examen de necropsia. Durante el examen postmortem macroscópico, el kiwi tenía marcada hepatoesplenomegalia, mientras que el kaka y las dos palomas neozelandesas tenían los pulmones inflamados, un poco firmes y de color rojo oscuro. Histológicamente había una extensa necrosis hepatocelular en el hígado del kiwi mientras que el kaka y las dos palomas neozelandesas mostraron severa neumonía broncointersticial fibrinosa. En el kiwi, estaban presentes organismos protozoarios dentro de los hepatocitos y de las células de Kupffer en el hígado, y en el kaka y en las dos palomas neozelandesas se observaron dentro de las células epiteliales y en los macrófagos del intersticio del pulmón. El diagnóstico de toxoplasmosis se confirmó con inmunohistoquímica y PCR de tejido de hígado y pulmón o de ambos, fijado con formalina e incluido en parafina. La genotipificación de hasta siete marcadores reveló que un aislamiento atípico Tipo II de Toxoplasma gondii estaba presente en al menos tres de los casos. Este estudio proporciona evidencia de que T. gondii puede causar mortalidad de estas especies endémicas y sugiere que se necesita más investigación para determinar la magnitud de la morbilidad y mortalidad causada por este parásito en fauna aviaria que es única de Nueva Zelanda.

From January 2010 to March 2013, a captive colony of 83 black kites (Milvus migrans subsp.) in France experienced increased mortality related to atherosclerosis with an incidence of 4.4% per year. On histopathology, all kites had advanced atherosclerotic lesions, with several birds presenting abdominal hemorrhage and aortic rupture. In January 2012, a dietary change was instituted and consisted of introducing fish into the kites' diet. During the following 15 mo, the plasma lipid profile was monitored as well as body weight, food offered, and flight activity. Total and low-density lipoprotein cholesterol initially increased, but in December 2012 and March 2013, an overall decrease from initial values was observed. High-density lipoprotein cholesterol also increased during this period. Despite positive plasma lipid changes induced by dietary modifications, there was no decrease in mortality from atherosclerosis, which was probably associated with the severity of the atherosclerotic lesions at time of dietary management. However, owing to the long and progressive development of atherosclerotic lesions, long-term beneficial effects are probable. This report suggests that black kites are particularly susceptible to atherosclerosis and aortic dissection in captivity. To prevent degenerative diseases associated with captivity in birds of prey, species-specific lifestyle and dietary requirements and susceptibility to these diseases should be considered.

Reporte de Caso—Brote de aterosclerosis en una población cautiva de milano negro (Milvus migrans subsp.) en Francia y el efecto de la nutrición en el perfil lipídico plasmático.

Entre enero del 2010 a marzo del 2013, una colonia en cautiverio de 83 milanos negros (Milvus migrans subsp.) en Francia experimentó un aumento de la mortalidad relacionada con aterosclerosis, con una incidencia de 4.4% por año. En la histopatología, todos los milanos tenían lesiones ateroscleróticas avanzadas, con varias aves que presentaban hemorragia abdominal y ruptura aórtica. En enero del 2012, se instituyó un cambio en la dieta que consistió en la introducción de pescado en la dieta de los milanos. Durante los siguientes 15 meses, se estudió el perfil lipídico plasmático, así como el peso corporal, la comida ofrecida, y la actividad de vuelo. El colesterol total de lipoproteínas de baja densidad aumentó inicialmente, pero en diciembre del 2012 y marzo de 2013, se observó una disminución general de los valores iniciales. El colesterol de lipoproteínas de alta densidad también aumentó durante este período. A pesar de los cambios positivos de lípidos plasmáticos inducidos por modificaciones en la dieta, no hubo una disminución en la mortalidad por aterosclerosis, lo que probablemente se asocia con la gravedad de las lesiones ateroscleróticas al momento del manejo de la dieta. Sin embargo, debido al desarrollo largo y progresivo de las lesiones ateroscleróticas, son probables los efectos beneficiosos a largo plazo. Este informe sugiere que los milanos negros son particularmente susceptibles a la aterosclerosis y a la disección aórtica en cautiverio. Para prevenir las enfermedades degenerativas asociadas con la cautividad en las aves de presa, se deben considerar los requerimientos dietéticos, los estilos de vida y la susceptibilidad a estas enfermedades de manera específica para cada especie.

This report confirms a recent outbreak of a Leucocytozoon caulleryi infection in a commercial broiler breeder flock in South Korea. Seven, 18-day-old broiler breeders (Gallus gallus) were necropsied following a history of depression, sudden death, and subcutaneous hemorrhages. On necropsy, subcutaneous hemorrhages were identified in the wings and legs, pectoral and thigh muscles, thymus, epicardium, pancreas, and kidneys. On histopathology, there were numerous schizonts and merozoits of a Leucocytozoon sp. noted in the heart, spleen, liver, kidneys, thymus, and bursa of Fabricius. Molecular analysis of the mitochondrial cytochrome oxidase b confirmed that the causative agent was Leucocytozoon caulleryi. Although L. caulleryi was diagnosed previously in South Korea, there had been no reports of L. caulleryi over the past several decades.

Reporte de Caso—Diagnóstico de la infección en Leucocytozoon caulleryi en rereproductores pesados comerciales en Corea del Sur.

Este informe confirma un brote reciente de la infección con Leucocytozoon caulleryi en un lote comercial de reproductoras pesadas en Corea del Sur. Se realizó la necropsia de siete reproductores de 18 días de edad (Gallus gallus) que tenían una historia de depresión, muerte repentina y hemorragias subcutáneas. A la necropsia, se identificaron hemorragias subcutáneas en las alas y las piernas, los músculos pectorales y del muslo, el timo, epicardio, páncreas y los riñones. A la histopatología, se observaron numerosos esquizontes y merozoitos de Leucocytozoon sp. especialmente en el corazón, bazo, hígado, riñones, timo y en la bolsa de Fabricio. El análisis molecular del gene mitocondrial citocromo b oxidasa confirmó que el agente causal era Leucocytozoon caulleryi. Aunque L. caulleryi fue diagnosticado previamente en Corea del Sur, no había reportes de L. caulleryi durante las últimas décadas.

An outbreak of proventricular dilatation disease (PDD), a fatal inflammatory disease of psittacines (Aves: Psittaciformes), is described in native Brazilian psittacines. Twenty captive psittacines that died of suspected PDD were necropsied and 10 were submitted to histopathology, reverse transcriptase PCR (RT-PCR), and immunohistochemistry (IHC) for avian bornavirus (ABV). Examined species were one pileated parrot (Pionopsitta pileata), three vinaceous-breasted parrots (Amazona vinacea), two blue-winged macaws (Primolius maracana), one scarlet macaw (Ara macao), one chestnut-fronted macaw (Ara severa), one scaly-headed parrot (Pionus maximiliani), and one red-browed Amazon parrot (Amazona rhodocorytha). Gross examination and histopathology revealed typical PDD lesions in all birds. The presence of ABV was confirmed in four psittacines including one red-browed Amazon parrot, one blue-winged macaw, one scarlet macaw, and one chestnut-fronted macaw. In the red-browed Amazon parrot and in one blue-winged macaw, IHC demonstrated ABV antigens in the nucleus and cytoplasm of cells in various organs. This is the first description of PDD by ABV in Brazilian psittacines and indicates the necessity for adopting a strategic control plan for reducing its impact in native birds.

Reporte de Caso—Enfermedad de dilatación proventricular fatal en psitácidos nativos en cautiverio en Brasil.

Un brote de la enfermedad de dilatación proventricular (con las siglas en inglés PDD), que es una enfermedad inflamatoria fatal de los psitácidos (Aves : Psittaciformes ), se describe en psitácidos nativos de Brasil. Se practicó la necropsia de veinte psitácidos cautivos que se sospechó murieron de la enfermedad de dilatación proventricular y diez fueron sometidos a estudio histopatológico, por transcripción reversa y PCR, inmunohistoquímica (IHC) para bornavirus aviar (ABV). Las especies examinadas fueron uno lorito carirrojo (Pionopsitta pileata), tres loros vinosos (Amazona vinacea), dos guacamayos maracaná (Primolius maracana), un guacamayo macao (Ara macao), un guacamayo severo (Ara severa), un loro de Maximilian (Pionus maximiliani), y una amazona de frente roja (Amazona rhodocorytha). El examen macroscópico y la histopatología revelaron lesiones típicas la enfermedad de la dilatación proventricular en todas las aves. La presencia del bornavirus aviar se confirmó en cuatro psitácidos como en la amazona de frente roja, un guacamayo maracaná, el guacamayo macao y el guacamayo severo. En la amazona de frente roja y en un guacamayo maracaná, la inmunohistoquímica demostró antígenos del bornavirus aviar en el núcleo y el citoplasma de las células en diversos órganos. Esta es la primera descripción de la enfermedad de dilatación proventricular por bornavirus aviar en psitácidos brasileños y también indica la necesidad de adoptar un plan de control estratégico para la reducción de su impacto en las aves nativas.