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2 April 2014 One-Step Real-Time Reverse Transcription–PCR for the Detection of Turkey Reoviruses
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Abstract

During late 2010 and early 2011, an unusual problem of lameness and swollen hock joints in commercial turkeys was reported in the upper Midwest, which continues to this day. The disease caused substantial economic losses to turkey producers. Reovirus was isolated from tendons and joint fluids of lame turkeys submitted to the Minnesota Veterinary Diagnostic Laboratory. This study was undertaken to develop a TaqMan real-time reverse transcription-PCR (rRT-PCR) assay for the early detection of turkey reoviruses (both enteric and lameness strains). A primer probe set was designed from the conserved region of the S4 segment of the turkey reovirus genome. The newly developed rRT-PCR was specific for the detection of turkey reoviruses. The detection limit of this assay was 10 genome copies per reaction. For the TARV-MN4 strain of turkey arthritis reovirus, one 50% tissue culture infectious dose was equivalent to 11.6 ± 0.2 genome copies. The highest coefficient of variation for intraexperimental and interexperimental variability was 0.08 and 0.06, respectively, indicating the reproducibility of the assay. This new test should be useful for the detection of turkey enteric and arthritis reoviruses.

Método de transcripción reversa y PCR en un solo paso para la detección de reovirus de pavos.

Durante finales del año 2010 y principios del 2011, se informó de un problema poco común de cojera e inflamación de corvejones en pavos comerciales en el Medio Oeste de los Estados Unidos, que continúa hasta este momento. La enfermedad ha causado substanciales pérdidas económicas a los productores de pavo. Se aisló un reovirus de los tendones y de los fluidos de las articulaciones de los pavos con cojera enviados al Laboratorio de Diagnóstico Veterinario de Minnesota. Este estudio se realizó para desarrollar un método de transcripción reversa y PCR en tiempo real (rRT-PCR) con sondas TaqMan para la detección temprana de los reovirus de pavo (cepas entéricas y cepas causantes de cojera). Se diseñó un conjunto de iniciadores para la región conservada del segmento S4 del genoma del reovirus de pavo. El método de rRT-PCR recientemente desarrollado era específico para la detección de reovirus de pavo. El límite de detección de este ensayo fue de 10 copias de genoma por reacción. Para la cepa TARV-MN4 de reovirus de pavo causante de artritis, una doses infectante 50% en cultivo de tejidos fue equivalente a 11.6 ± 0,2 copias del genoma. Los mayores coeficientes de variación para la variabilidad intraexperimental e interexperimental fueron de 0.08 y 0.06, respectivamente, indicando la reproducibilidad del ensayo. Esta nueva prueba puede ser útil para la detección de reovirus de pavos entéricos y causantes de artritis.

American Association of Avian Pathologists
Sunil K. Mor, Harsha Verma, Aschalew Z. Bekele, Tamer A. Sharafeldin, Robert E. Porter, and Sagar M. Goyal "One-Step Real-Time Reverse Transcription–PCR for the Detection of Turkey Reoviruses," Avian Diseases 58(3), 404-407, (2 April 2014). https://doi.org/10.1637/10779-012314-Reg.1
Received: 24 January 2014; Accepted: 1 April 2014; Published: 2 April 2014
JOURNAL ARTICLE
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