Clinical signs such as respiratory signs, egg drop, and mortality have been reported in field cases of low pathogenic avian influenza by H9N2 avian influenza virus (AIV) but have rarely been reproduced by the virus alone. Thus, virus reisolation rates and titers in tissues were measured for vaccine efficacy testing. In the present study, we established a clinical sign-based vaccine efficacy test by reproduction of highly frequent conjunctivitis (77.8%–90%) via binocular instillation of an H9N2 virus (01310 strain, 1 × 10⁶ EID₅₀/10 µl for each eye). Specific-pathogen-free chickens were assigned to vaccine and control groups, and the vaccine group was inoculated intramuscularly with a commercial H9N2 inactivated oil emulsion vaccine. The chickens were challenged by 01310 via binocular instillation at 2 and 4 wk postvaccination (WPV). The positive rates of conjunctivitis and virus reisolation were significantly different between the vaccine and control groups (conjunctivitis at 2 WPV, 0% vs. 77.8%, and at 4 WPV, 0% vs. 80%). Vaccine antibody was detected in tears as well as in serum samples of the vaccine group before challenge. The conjunctivitis model may be useful for efficacy testing of AI vaccine due to a clinical symptom-based read of results, but further efficacy testings with different types, doses of AI vaccines, and challenge viruses will be required to complete the evaluation of our model.

Modelo de conjuntivitis inducida por el virus de la influenza aviar H9N2 para la evaluación de la eficacia de vacunas.

Los signos clínicos tales como signos respiratorios, caída de la producción de huevo y mortalidad han sido reportados en casos de campo del virus de la influenza aviar de baja patogenicidad H9N2, pero rara vez se han reproducido estos signos con la inoculación única de este virus. Por lo tanto, se midieron los porcentajes de aislamiento del virus y los títulos en los tejidos para evaluar la eficacia de la vacuna. En el presente estudio, se ha establecido una evaluación basada en los signos clínicos para evaluar la eficacia de las vacunas mediante la reproducción de la conjuntivitis que es frecuente (77.8%–90%) mediante la instilación en los dos ojos de un virus H9N2 (cepa 01310, con un título de 1 × 10⁶ dosis infectantes 50% en embrión de pollo por 10 µl, inoculadas en cada ojo). Aves libres de patógenos específicos se asignaron a los grupos vacunados y controles, las aves del grupo vacunado fueron inoculadas por vía intramuscular con una vacuna inactivada comercial emulsionada en aceite con el subtipo H9N2. Los pollos fueron desafiados por instilación en los dos ojos con la cepa 01310 a las dos y cuatro semanas después de la vacunación. Los porcentajes de aves con conjuntivitis y de aislamiento del virus fueron significativamente diferentes entre los grupos de aves vacunadas y controles (presencia de conjuntivitis a las dos semanas después de la vacunación fue de cero por ciento contra 77.8%, respectivamente y a las cuatro semanas después de la inoculación fue de cero por ciento contra 80%, respectivamente). Se detectaron anticuerpos contra la vacuna en las lágrimas, así como en las muestras de suero del grupo vacunado antes del desafío. Este modelo utilizando el desarrollo de la conjuntivitis puede ser útil para las evaluación de la eficacia de las vacunas de influenza aviar debido a la detección de los signos clínicos, pero se requiere llevar a cabo pruebas de eficacia adicionales con diferentes tipos y dosis de vacunas contra la influenza aviar y con virus de desafío distintos para completar la evaluación de este modelo.