Beauveria bassiana (Balsamo-Crivelli) Vuillemin (Sordariomycetes: Hypocreales) es un hongo entomopatógeno que produce metabolitos secundarios que se han asociado como factores de virulencia en el proceso patogénico de insectos. El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad tóxica de un extracto metanólico obtenido del micelio de una cepa de B. bassiana patógena en larvas neonatas de Spodoptera exigua (Hübner) y Spodoptera frugiperda (Hübner) (Lepidoptera: Noctuidae) para determinar su potencial insecticida, y estimar su participación en el proceso patogénico del hongo. Se seleccionó la cepa más patógenica hacia ambas especies mediante bioensayos con conidias y de la cepa seleccionada se obtuvo un extracto metanólico a partir de micelio mediante cromatografía en columna. El extracto metanólico se administró a las larvas por ingestión para evaluar su actividad y también fue sometido a un análisis de grupos funcionales mediante espectrometría de infrarrojo. Los resultados indicaron que el extracto metanólico causó mayor mortalidad que las conidias en ambos insectos y los grupos funcionales presentes en el extracto se asocian a la bassianolida, beauvericina y oosporeina, que son metabolitos secundarios fúngicos con diferentes funciones biológicas. El extracto metanólico tiene potencial para ser utilizado en las prácticas del control biológico porque el porcentaje de mortalidad en ambas especies en la concentración más alta indica que es suficientemente elevado como para considerar que la plaga sea reducida a umbrales poblacionales inocuos a los cultivos.