Immunohistochemical detection of Marek's disease virus-EcoRI-Q (Meq) in tumor cells is one of the most accurate methods for the definitive diagnosis of Marek's disease (MD). We previously generated several anti-Meq monoclonal antibodies for immunohistochemistry (IHC) to detect Meq expressed in experimentally induced MD lymphomas in formalin-fixed, paraffin-embedded sections. Here we evaluated the usefulness of anti-Meq monoclonal and cocktail antibodies (mix of three anti-Meq monoclonal antibodies: 3A3-112, 5F7-82, and 6B5-128) for the immunohistochemical diagnosis of MD in 104 field cases of chicken lymphoma that occurred in Japan between 1976 and 2023. Results revealed 100 cases of T-cell lymphoma, of which 99 cases were Meq+ with the cocktail antibody. Two distinct histological subtypes have been identified in MD tumors, suggesting that the morphological diagnosis of MD is complex and emphasizing the need for immunohistochemical detection. For the diagnosis of chicken B-cell lymphoma, detection of B cell-activating factor belonging to the tumor necrosis factor family receptor (BAFF-R) by IHC was found to be useful. Four cases of B-cell lymphoma consistently grew uniformly, and Meq was undetectable. In conclusion, Meq detection using IHC is valuable for the pathological diagnosis of field MD cases.

Diagnóstico inmunohistoquímico de la enfermedad de Marek basado en la detección de Meq en 104 casos de campo de linfoma de pollo.

La detección inmunohistoquímica del virus de la enfermedad de Marek-EcoRI-Q (Meq) en células tumorales es uno de los métodos más precisos para el diagnóstico definitivo de la enfermedad de Marek (EM). Anteriormente generamos varios anticuerpos monoclonales anti-Meq para inmunohistoquímica (IHC) para detectar Meq expresado en linfomas de Marek inducidos experimentalmente en secciones fijadas con formalina e incluidas en parafina. Aquí evaluamos la utilidad de los anticuerpos monoclonales anti-Meq y mezcla de tres anticuerpos monoclonales anti-Meq: 3A3-112, 5F7-82 y 6B5-128 para el diagnóstico inmunohistoquímico de Marek en 104 casos de campo de linfoma de pollo que ocurrió en Japón entre 1976 y 2023. Los resultados revelaron 100 casos de linfoma de células T, de los cuales 99 casos eran positivos a la presencia de Meq (Meq+) con la mezcla de anticuerpos. Se han identificado dos subtipos histológicos distintos en los tumores de la EM, lo que sugiere que el diagnóstico morfológico de la enfermedad Marek es complejo y enfatiza la necesidad de la detección IHC. Para el diagnóstico del linfoma de células B del pollo, se encontró que fue útil la detección del factor activador de células B perteneciente al receptor de la familia del factor de necrosis tumoral (BAFF-R) mediante IHC. Cuatro casos de linfoma de células B crecieron de manera consistente y uniforme y Meq fue indetectable. En conclusión, la detección del gene Meq mediante IHC es valiosa para el diagnóstico patológico de casos de la EM en el campo.

Necrotic enteritis (NE) is a significant intestinal disease that negatively impacts producer economics and animal welfare. Chickens are predisposed to this disease by infection with the parasite Eimeria, resulting in coccidiosis and subsequent Clostridium perfringens overgrowth. Pathology is caused by damage to enterocytes of the small intestine and blunting of the villus. The hypothesis of this study was that NE results in disruption of cell–cell communication crucial for intestinal stem cell proliferation, differentiation, and restoration of absorptive function. Developmental Wnt and Notch signaling pathways fate stem cells towards formation of specialized secretory or absorptive cell types, shaping intestinal epithelium composition and morphology. The objective of this study was to use a subclinical NE challenge model to analyze effects of C. perfringens and Eimeria maxima on intestinal morphology and developmental signaling pathways. Chicks were placed, at hatch, in battery cages, and they were orally administered Eimeria maxima alone (EM) at 14 days of age, C. perfringens alone (CP) at 19 days of age, or E. maxima at 14 days of age, followed 5 days later with C. perfringens (EM/CP). Uninfected chickens served as the nonchallenged control (NC) group. Gene expression was measured using in situ hybridization and quantitative PCR in the small intestine of chickens at 14, 17, 19, 21, and 23 days of age. Intestinal tissues were histologically scored for lesions, inflammation and coccidia. Statistical analysis was performed using Tukey's Honestly Significant Difference test, Steel-Dwass All Pairs, Kruskal-Wallis, or Dunn's multiple-comparisons tests. EM and EM/CP infections considerably impacted jejunum morphology by increasing crypt depth and shortening villi (P < 0.05). Crypt depth elongation was observed exclusively in chickens inoculated with EM or EM/CP, but villus blunting was apparent in EM, CP, and EM/CP chickens compared to NC. Histological observations of the chicken's small intestine revealed an increase in the cumulative pathology scores in chickens with EM or EM/CP (P < 0.05). Expression of hairy and enhancer of split-1 (Hes1) messenger RNA (mRNA) that regulates stem cell differentiation and inflammation decreased in EM-, CP-, and EM/CP-infected chickens. Hes1 mRNA was localized to intestinal crypts and lymph within the villi using in situ hybridization, indicating that the decrease in expression could be related to intestinal stem cells or macrophages in the lymph that contribute to the immune response. Increased goblet cell density and relative expression of mucin 2 mRNA was observed in CP-infected chickens compared to co-infection with EM/CP. The contribution of each pathogen to altered villus height, crypt depth, stem cell proliferation and differentiation, and developmental signaling in the jejunum of broiler chickens was revealed by single infection. Further research into mechanisms that influence Notch and Wnt signaling in broilers could aid in restoring intestinal homeostasis after infection and lowering economic and animal welfare costs.

La enteritis necrótica subclínica afecta la vía señalización de Notch y Wnt en el desarrollo y la morfología intestinal en el intestino delgado de pollos de engorde.

La enteritis necrótica (EN) es una enfermedad intestinal importante que afecta negativamente la economía de los productores y el bienestar animal. Los pollos están predispuestos a esta enfermedad por la infección con el parásito Eimeria, que provoca coccidiosis y el posterior sobrecrecimiento de Clostridium perfringens. La patología es causada por daño a los enterocitos del intestino delgado y atrofia de las vellosidades. La hipótesis de este estudio fue que la enteritis necrótica produce una interrupción de la comunicación entre células, crucial para la proliferación de células madre intestinales, diferenciación y restauración de la función de absorción. Las vías de señalización de Wnt y Notch en el desarrollo influyen en las células madre hacia la formación de tipos de células secretoras o de absorción especializadas, lo que determina la composición y la morfología del epitelio intestinal. El objetivo de este estudio fue utilizar un modelo de desafío subclínico de enteritis necrótica para analizar los efectos de C. perfringens y Eimeria maxima en la morfología intestinal y las vías de señalización del desarrollo. Al momento de la eclosión, los pollos se colocaron en jaulas en batería, y se les administró por vía oral Eimeria maxima por sí sola (EM) a los 14 días de edad, C. perfringens por sí sola (CP) a los 19 días de edad, o E. maxima a los 14 días de edad, seguido 5 días después con C. perfringens (EM/CP). Los pollos no infectados sirvieron como grupo de control no desafiado (NC). La expresión génica se midió utilizando hibridación in situ y PCR cuantitativa en el intestino delgado de los pollos a los 14, 17, 19, 21 y 23 días de edad. Los tejidos intestinales se calificaron histológicamente para lesiones, inflamación y coccidios. El análisis estadístico se realizó utilizando la prueba de diferencia honestamente significativa de Tukey, Steel-Dwass para comparar las medias de todos los pares, Kruskal-Wallis o las pruebas de comparaciones múltiples de Dunn. Las infecciones con E. maxina y E. maxima/C. perfringens afectaron considerablemente la morfología del yeyuno al aumentar la profundidad de las criptas y acortar las vellosidades (P < 0.05). La elongación de la profundidad de las criptas se observó exclusivamente en pollos inoculados con E. maxima o E. maxima/C. perfringens, pero el acortamiento de las vellosidades fue evidente en los pollos E. maxima, C. perfringens y la combinación E. maxima/C. perfringens en comparación con el control no desafiado. Las observaciones histológicas del intestino delgado del pollo revelaron un aumento en las puntuaciones de patología acumuladas en pollos con E. maxima y E. maxima/C. perfringens (P < 0.05). La expresión del ARN mensajero (ARNm) del gene Hes1 que regula la diferenciación de células madre y la inflamación disminuyó en los pollos infectados con E. máxima, C. perfringens y E. maxima/C. perfringens. El ARNm de Hes1 se localizó en las criptas intestinales y vasos linfáticos dentro de las vellosidades mediante hibridación in situ, lo que indica que la disminución de la expresión podría estar relacionada con las células madre intestinales o los macrófagos en vasos linfáticos que contribuyen a la respuesta inmunitaria. Se observó un aumento de la densidad de células caliciformes y la expresión relativa del ARNm de Muc2 en los pollos infectados con C. perfringens en comparación con la coinfección con E. maxima/C. perfringens. La contribución de cada patógeno en la alteración de la altura de las vellosidades, la profundidad de las criptas, la proliferación y diferenciación de células madre y la vía de señalización del desarrollo en el yeyuno de los pollos de engorde se reveló mediante una sola infección. Una mayor investigación de los mecanismos que influyen en la señalización de Notch y Wnt en los pollos de engorde podría ayudar a restablecer la homeostasis intestinal después de la infección y reducir los costos económicos y de bienestar animal.

Originally discovered and characterized in 1998, the pigeon adenovirus 1 (PiAdV-1) has received little attention because of its low contagiousness and lethality or misperception by scientists. Consequently, the virus's pathogenic properties are still unknown. Here, we describe an outbreak of PiAdV-1 in a flock of farmed pigeons. Twenty-five percent of adults and 40% of young pigeons died suddenly without presentations in the outbreak. The dead pigeons' gross pathology and histological examination revealed severe liver and kidney inflammatory damage, presenting as extensive liver necrosis and swollen and congested kidneys. The courses of PiAdV-1 infection matched those classified as pigeon adenovirosis type 2, according to clinical presentations. Furthermore, we attempted to isolate the virus strain using different cell lines. The PiAdV-1 strain could proliferate in chicken embryo fibroblast, chicken liver hepatocellular carcinoma, and pigeon embryo primary fibroblast cell lines; it specifically infected liver and kidneys as its target organs, and could proliferate effectively in pigeon embryo kidney and liver cells. This offers us a fresh viewpoint to reconsider and comprehend the pathophysiology of PiAdV-1, as well as a novel concept for large-scale PiAdV-1 proliferation.

Aislamiento del adenovirus 1 de palomas en aves muertas con hepatitis fulminante.

Descubierto y caracterizado originalmente en 1998, el adenovirus 1 de las palomas (PiAdV-1) ha recibido poca atención debido a su baja infecciosidad y letalidad o por la percepción errónea por parte de los científicos. En consecuencia, las propiedades patógenas del virus aún son desconocidas. En este artículo, se describe un brote de adenovirus 1 de las palomas en una parvada de palomas en una granja. El veinticinco por ciento de los adultos y el 40% de los pichones murieron repentinamente sin presentar signos durante el brote. La patología macroscópica y el examen histológico de las palomas muertas revelaron un daño inflamatorio severo en el hígado y en los riñones, que se presentó como una necrosis hepática extensa y riñones inflamados y congestionados. Los cursos de la infección por el adenovirus 1 de las palomas fueron similares a los clasificados como adenovirosis de las palomas tipo 2, según las presentaciones clínicas. Además, se intentó aislar la cepa del virus utilizando diferentes líneas celulares. La cepa adenovirus 1 de las palomas pudo replicarse en fibroblastos de embrión de pollo, carcinoma hepatocelular de hígado de pollo y líneas celulares de fibroblastos primarios de embrión de paloma; infectó específicamente el hígado y los riñones como órganos diana, y pudo proliferar eficazmente en células de riñón e hígado de embrión de paloma. Esto ofrece un nuevo punto de vista para reconsiderar y comprender la fisiopatología del adenovirus 1 de las palomas, así como un concepto novedoso para la proliferación de este virus a gran escala.

In January 2022, highly pathogenic (HP) clade 2.3.4.4b A/goose/Guangdong/1/1996-lineage H5N1 influenza A viruses were detected and confirmed in 19 of 68 (27.9%) live-trapped migratory waterfowl in a western Tennessee national wildlife refuge. Genetic analysis indicated that all the detected viruses were and closely related and belonged to genotype A1. To our knowledge, these represent the first reported detections of HP H5N1 in wild birds in the U.S. Mississippi Flyway since their incursion into North America via wild birds in late 2021.

Nota de investigación- Detección temprana de influenza aviar altamente patógena (H5) en aves acuáticas silvestres de la ruta migratoria del Mississippi, en el año 2022.

En enero del 2022, se detectó y confirmó la presencia de virus de influenza A H5N1 de linaje A/goose/Guangdong/1/1996 de clado 2.3.4.4b altamente patógenos (HP) en 19 de 68 (27.9 %) de las aves acuáticas migratorias atrapadas vivas en un refugio nacional de vida silvestre del oeste de Tennessee. El análisis genético indicó que todos los virus detectados estaban estrechamente relacionados y pertenecían al genotipo A1. Hasta donde se conoce, éstas representan las primeras detecciones notificadas de influenza aviar de alta patogenicidad H5N1 en aves silvestres en la ruta migratoria del Mississippi de los Estados Unidos, desde su incursión en América del Norte a través de aves silvestres a fines del año 2021.

Since 2018, the Poultry Diagnostic and Research Center at the University of Georgia has observed an increased, yet sporadic, incidence of Castellaniella spp. isolation from commercial broiler breeders from various integrators. To our knowledge, this organism had never been reported in commercial poultry. The commonalities among cases were a presenting complaint of increased mortality, lameness, and swollen wattles. Postmortem examination revealed hock synovitis, swollen wattles, inflammation, and marked subcutaneous mandibular edema that extended along the ventral neck. Swabs were taken from affected tissues for conventional aerobic culture, revealing a gram-negative bacillus organism that produced very small, almost pinpoint, clear colonies on 5% sheep blood agar but no growth on MacConkey agar. The organism was characterized as strongly oxidase positive and indole negative. Further identification involving 16S rRNA sequencing confirmed the unknown organism as Castellaniella spp. The recurring isolation of this organism warrants further investigation into factors such as source, mode of transmission, primary pathogen status, prevention, and treatment options. The animal health community should be aware of the potential of Castellaniella spp. to infect chickens, along with its clinical characteristics and microbiologic presentation.

Asociación de Castellaniella spp. con eventos de mortalidad en reproductoras de pollos de engorde.

Desde el año 2018, en el Centro de Diagnóstico e Investigación Avícola de la Universidad de Georgia se ha observado una mayor incidencia, aunque esporádica, del aislamiento de Castellaniella spp. en reproductoras pesadas comerciales de varios integradores. Hasta donde se sabe, este organismo nunca se había reportado en la avicultura comercial. Las similitudes entre los casos fueron reportes de la presentación de mayor mortalidad, cojera y barbillas inflamadas. El examen post mortem reveló sinovitis de los corvejores, barbillas inflamadas, inflamación y un marcado edema mandibular subcutáneo que se extendía a lo largo del cuello ventral. Se tomaron hisopos de los tejidos afectados para el cultivo aeróbico convencional, que reveló un organismo tipo bacilo Gram negativo que produjo colonias muy pequeñas, casi puntiformes y claras en agar sangre de oveja al 5%, pero sin crecimiento en agar MacConkey. El organismo se caracterizó por presentar una reacción fuertemente positiva a oxidasa positivo e indol negativo. Una identificación posterior mediante la secuenciación del ARNr 16S confirmó que el organismo desconocido era Castellaniella spp. El aislamiento recurrente de este organismo justifica una mayor investigación de factores como la fuente, el modo de transmisión, la posibilidad de su papel como patógeno primario, la prevención y las opciones de tratamiento. La comunidad de salud animal debe ser consciente del potencial de Castellaniella spp. para infectar a los pollos, junto con sus características clínicas y presentación microbiológica.

Cryptosporidiosis is a sporadic protozoal disease of chicken and turkeys accompanied by respiratory and/or gastrointestinal disease, and it may cause considerable morbidity and mortality. In October 2022, 12 (nine live and three dead) 46-day-old Ross 708 broiler chickens were received for necropsy at the Poultry Diagnostic and Research Center of the University of Georgia. The flock of 99,200 birds was experiencing an abrupt increase in respiratory signs and mortality associated with bacterial septicemia. At clinical examination, five out of nine live birds showed respiratory noise and marked bilateral swelling of eyelids. At macroscopic examination, birds had abundant muco-catarrhal exudate in the trachea (9/12) and moderate white-yellow fibrinous exudate deposition within the air sacs (7/12), pericardium (6/12), and liver capsule (4/12). Cloacal bursas were atrophic (5/12), and femoral head necrosis was observed in more than half of the birds (7/12). Escherichia coli was isolated in pure culture from (1/2) pericardial sacs. Histology revealed moderate to severe heterophilic conjunctivitis (2/6 tissue sections), tracheitis (2/17 tissue sections), and bursitis (3/5 tissue sections) associated with marked protozoal colonization of the epithelial apical surface, marked epithelial hyperplasia, and severe lymphoid depletion in a subset of sections. Protozoa were morphologically compatible with Cryptosporidium spp. The protozoa colonizing the bursa were identified as Cryptosporidium baileyi by PCR and sequencing. Concurrent moderate to severe lymphoplasmacytic conjunctivitis (6/6 tissue sections) and tracheitis (17/17 tissue sections) were compatible with infectious bronchitis virus infection, which was confirmed by real-time reverse-transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) and characterized as a Massachusetts-type strain. Sections of tracheas tested negative for infectious laryngotracheitis by RT-PCR. The presence of C. baileyi in association with respiratory and bursal infections in broiler chickens highlights the importance of histopathology in the comprehensive diagnosis of respiratory diseases in poultry.

Reporte de caso- Criptosporidiosis respiratoria en una parvada de pollos de engorde comerciales en el noreste de Georgia.

La criptosporidiosis es una enfermedad protozoaria esporádica de pollos y pavos acompañada de enfermedad respiratoria y/o gastrointestinal, y puede causar una morbilidad y mortalidad considerables. En octubre de 2022, se recibieron en el Centro de Diagnóstico e Investigación Avícola de la Universidad de Georgia, 12 pollos de engorde Ross 708 de 46 días (nueve vivos y tres muertos) para realizar estudios de necropsia. La parvada de 99,200 aves estaba experimentando un aumento abrupto de los signos respiratorios y mortalidad asociada con septicemia bacteriana. En el examen clínico, cinco de las nueve aves vivas mostraron ruido respiratorio y una marcada inflamación bilateral de los párpados. En el examen macroscópico, las aves tenían abundante exudado mucocatarral en la tráquea (9/12) y acúmulo moderado de exudado fibrinoso blanco-amarillo dentro de los sacos aéreos (7/12), pericardio (6/12) y cápsula hepática (4/12). Las bolsas cloacales estaban atróficas (5/12), y se observó necrosis de la cabeza femoral en más de la mitad de las aves (7/12). Se aisló Escherichia coli en cultivo puro de (1/2) sacos pericárdicos. La histología reveló conjuntivitis heterofílica de moderada a severa (2/6 secciones de tejido), traqueítis (2/17 secciones de tejido) y bursitis (3/5 secciones de tejido) asociadas con colonización marcada de protozoarios de la superficie apical epitelial, marcada hiperplasia epitelial y severa depleción linfoide en un subconjunto de secciones. Los protozoos fueron morfológicamente compatibles con Cryptosporidium spp. Los protozoos que colonizaron la bolsa cloacal se identificaron como Cryptosporidium baileyi mediante PCR y secuenciación. La conjuntivitis linfoplasmocítica moderada a grave concurrente (6/6 secciones de tejido) y la traqueítis (17/17 secciones de tejido) fueron compatibles con la infección por el virus de la bronquitis infecciosa, que se confirmó mediante transcripción reversa y reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR) y se caracterizó como una cepa de tipo Massachusetts. Las secciones de tráqueas dieron negativo para laringotraqueítis infecciosa mediante RT-PCR. La presencia de C. baileyi en asociación con infecciones respiratorias y de la bolsa de Fabricio en pollos de engorde resalta la importancia de la histopatología en el diagnóstico integral de enfermedades respiratorias en aves comerciales.