Infectious laryngotracheitis (ILT) is a significant upper respiratory tract disease of chickens with a worldwide distribution. Differentiating between wild-type and vaccine strains of ILT virus (ILTV) would be useful for enhancing disease control, and in the early stages of a disease outbreak molecular diagnostic tools for the detection and differentiation of the circulating virus could be applied. This study developed TaqMan real-time PCR (qPCR) assays to detect and differentiate the glycoprotein G (gG)-deficient (ΔgG) ILTV candidate vaccine strain of ILTV from ILTV strains that contain the gG gene. The gG ve and gG-ve ILTV TaqMan assays were used in individual and multiplex format to detect, differentiate, and quantitate ILTV DNA in laboratory and clinical samples. The assays were highly sensitive and highly specific, with a detection limit of 10 viral template copies for each assay. Low interassay coefficients of variation were recorded (0.021–0.042 and 0.013–0.039) for gG ve and gG-ve TaqMan assays, respectively. The multiplex assay was successfully used to examine the replication kinetics of wild-type and ΔgG strains of ILTV in cultured leghorn male hepatoma cells and embryonated hen eggs under coinfection conditions. The results showed that the TaqMan qPCR assay, along with the ΔgG ILTV vaccine, has the potential to be used in a “Differentiating Infected from Vaccinated Animals” strategy for the control and eradication of ILT.
Desarrollo y validación de un ensayo de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real con una sonda TaqMan para la detección cuantitativa y para diferenciar las cepas silvestres del virus de la laringotraqueitis infecciosa de una cepa candidata para vacuna que carece de la glicoproteína G.
La laringotraqueitis infecciosa aviar (ILT) es una enfermedad importante del tracto respiratorio superior del pollo y que tiene una distribución en todo el mundo. La diferenciación entre las cepas silvestres y vacunales sería útil para mejorar el control de la enfermedad y se podrían aplicar herramientas de diagnóstico molecular para la detección y diferenciación de los virus circulantes en las primeras etapas de un brote de la enfermedad. En este estudio se desarrolló un ensayo de PCR en tiempo real (qPCR) con sondas TaqMan para detectar virus que carecen de la glicoproteína G que son candidatos para vacunas contra la laringotraqueítis (ΔgG) y diferenciarlos de las cepas que contienen el gene gG. Los ensayos TaqMan gG ve y gG-ve se utilizaron en formatos individuales y múltiples para detectar, diferenciar y cuantificar el ADN viral en muestras del laboratorio y clínicas. Los ensayos fueron altamente sensibles y altamente específicos, con un límite de detección de 10 copias de ADN viral para cada ensayo. Se registraron bajos coeficientes de variación interensayo (de 0.021 a 0.042 y de 0.013 a 0.039) para los ensayos TaqMan gG ve y gG-ve, respectivamente. El ensayo múltiple se utilizó con éxito para estudiar la cinética de replicación de cepas silvestres y de cepas ΔgG del virus de la laringotraqueítis cultivados en células de hepatoma de machos Leghorn y en huevos embrionados de pollo en condiciones de coinfección. Los resultados mostraron que el ensayo TaqMan qPCR, junto con la vacuna ΔgG ILTV, tiene el potencial para ser utilizados en una estrategia de “diferenciación de animales infectados de animales vacunados” (DIVA) para el control y erradicación de la laringotraqueítis infecciosa aviar.
